nm23H1过表达对人白血病细胞系HL60细胞周期与分化的影响.docVIP

nm23H1过表达对人白血病细胞系HL60细胞周期和分化的影响 作者：袁茵，鲁欣，张美英，黄树林，王一飞 【摘要】 目的 探讨nm23H1基因过表达对人早幼粒白血病细胞株HL60细胞周期及分化的 影响 。 方法 构建nm23H1 cDNA的真核表达载体pEGFPN1nm23H1，脂质体介导瞬时转染HL60细胞；在荧光显微镜下观察nm23H1EGFP融合蛋白的表达情况；流式细胞术 分析 细胞周期变化；NBT还原比色法检测细胞的诱导分化能力。结果 转染48h nm23H1EGFP融合蛋白在HL60细胞内表达量最高，此时细胞周期处于S期的细胞明显增多，对分化诱导剂DMSO的敏感性下降。结论 nm23H1基因的过表达能促进HL60细胞的增殖和抑制其分化。 【关键词】 nm23H1基因；白血病；细胞周期；细胞分化 　　Abstract：Objective To investigate effects of nm23H1 overexpression on cell cycle and differentiation of HL60 cells. Methods Recombinant expression vector pEGFPN1nm23H1 was constructed and transfected into HL60 cells with the aid of liposome in a transient way. Expression of fusion protEin nm23H1EGFP was detected under the fluorescence microscope. Flow cytometry was adopted to analyze cell cycle. Differentiation rate of the DMSOinduced HL60 cells was tested by NBT reduction assay. Results Expression level of recombinant plasmid pEGFPN1nm23H1 in HL60 cells reached a peak at 48 h after transfection. Meanwhile, proportion of Sphase cells increased dramatically and HL60 cells became less sensitive to differentiation inducer DMSO. Conclusion Overexpression of nm23H1 gene could stimulate proliferation but inhibit differentiation of HL60 cells. nm23H1 gene might be a potential target of leukemia treatment. 　　Key words：nm23H1 gene；Leukemia；Cell cycle；Cell differentiation 　　0 引言 白血病是一种常见的造血系统恶性肿瘤。 目前 ，白血病在青少年恶性肿瘤中的发病率位居第一，在世界癌症总体发病率中位居第六，是严重危害人类健康的恶性疾病之一。 研究 发现，肿瘤转移抑制基因nm23H1的表达水平与多种血液恶性肿瘤的恶化呈正相关，与病人的存活时间呈负相关，其高表达可作为白血病和淋巴瘤预后不良的指标之一[1]。本研究构建了可融合表达nm23H1与报告基因绿色荧光蛋白（EGFP）的真核表达质粒，瞬时转染人早幼粒白血病细胞HL60，探讨了nm23H1基因过表达对HL60细胞周期及分化的影响，旨在为以nm23H1基因为分子靶点的白血病反义 治疗 提供依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 人早幼粒白血病细胞株HL60，nm23H1基因cDNA、真核表达质粒pEGFPN1，E.coli Top10菌株由本室保存；限制性内切酶EcoRⅠ、SacⅡ,T4 DNA连接酶，高保真DNA聚合酶PyrobestTM购自Takara公司；NBT粉剂为上海华舜公司产品；脂质体lipofectamineTM 2000购于Invitrogen；佛波酯（12Otetradecanoylphorbol 13acetate,TPA）为Sigma公司产品。 　　1.2 nm23H1真核表达质粒的构建 PCR扩增nm23H1