生物能学与代谢调节.ppt

2、有关热力学的一些基本概念 （1）体系（system）的概念、性质和状态 体系与环境：开放体系、封闭体系、隔离体系 体系的性质，如压力、体积、温度、组成、比热、表面张力等。 热力学用这些性质来描述一个体系所处的状态，将这些性质与状态之间的单值对应关系称为状态函数。状态函数的变化只与体系状态变化的始态和终态有关，而与状态变化的过程无关。 （3）热与功 是能的两种主要形式，是一个体系的状态在发生变化时与环境交换能量的两种形式。热是由于温度差而产生的能量传递方式，热的传递总是伴随着质点的无序形式；功是伴随着体系质点的定向移动，是一种有序的运动。 所有生物均不能利用热来做功，而是在恒温下利用化学能驱动生命过程。 1）利用正常机体的方法 用喂饲或注射的方法,使机体内进入大量某种代谢物,然后分析血液、组织或排泄物中的中间产物或终产物。此外,也有利用与代谢物相似的异常物质作为标记进入体内,研究其代谢过程。 例：利用性质稳定并易鉴定的异常物质,如苯脂酸代替脂肪酸喂饲动物,然后分析尿中带有苯环的物质,从而发现了乙酸是脂肪酸代谢的中间产物。 3）切除器官法 切除动物某种器官后,给予某种物质,观察代谢改变,可推知该器官的代谢机能。 例：用切除肝脏来研究含氮化合物的代谢；切除胰脏来研究糖尿病等。 4）组织切片或匀浆法 将新鲜组织制成切片或匀浆,然后与代谢物混合保温,数小时后分析代谢产物,以探知代谢物在此组织内的代谢变化。 如肝切片与铵盐混合保温数小时后,可发现铵盐减少而尿素增多,证明了铵盐可在肝脏中合成尿素。 2）核酸代谢和蛋白质生物合成的抑制剂 有些抗生素或药物能抑制微生物或癌细胞中核酸代谢,有的可破坏核酸的结构而影响其功能。如治疗痛风使用的7-碳-8-氮次黄嘌呤（别嘌呤)的结构与IMP相似,是黄嘌呤氧化酶的竞争性抑制剂,可以抑制黄嘌呤的氧化,减少尿酸的生成。同时,别嘌呤在体内经代谢转变与5-磷酸核糖-1－焦磷酸盐(PRPP)反应生成别嘌呤核苷酸。这样一方面消耗了PRPP,另一方面又可反馈抑制嘌呤核苷酸从头合成的酶,从而使嘌呤的合成减少。 结 束 5）脏器灌注法 剥离动物的器官,使其具有独立的循环体系,或摘出整个器官做离体实验,将器官浸在血液或符合生理条件的其他溶液中，将被试物质与血液混合,通过血管灌入器官中,然后分析从器官流出的血液,以确定其所含的代谢物。 此法只能了解代谢物在脏器中的终产物,而不能阐明其中代谢过程。例如,用氟乙酸灌流离体大鼠心脏可引起葡萄糖吸收的抑制,降低糖酵解和1－磷酸葡萄糖的堆积。 6）纯酶法及酶抑制剂法 研究某种特殊的代谢反应,可用提取的纯酶制剂。例如,用结晶磷酸化酶在体外试验糖原的分解作用。 若反应体系中有两种以上的酶存在,为区别反应究竟由何种酶所催化,可加入特异抑制剂使一种酶的活性受到抑制,则其前一反应的产物必致堆积,更有利于鉴别。例如,糖酵解过程中,碘乙酸专一性地抑制磷酸丙糖脱氢酶的活性,使磷酸丙糖在肌肉中堆积。 7）放射性核素示踪法 放射性核素是指原子序数相同,而原子量不同的同种元素。当化合物分子中的原子被相同元素的放射性核素所取代,而取代后的分子性质没有改变时,称“放射性核素示踪”。 含有放射性核素的代谢物在体内的代谢程序与正常代谢物完全相同，但因分子中有放射性核素的存在而具有不同的核物理性质,可用物理方法追踪其在体内的去向,并探讨其所转化的代谢产物。 放射性核素法具有灵敏度高(能测出10-14～10－18g水平),测定方法简便,合乎生理条件核能定位等特点,并可准确定量测定代谢物的转运和转化,已广泛用于代谢的示踪研究。 例1：以14C标记的乙酸给予动物,测定呼出的C02含有14C,可见乙酸在体内可分解为C02。 例2：利用羧基含14C的乙酸给予动物,则从机体分离的棕榈酸,从羧基碳原子开始,间隔的碳原子1、3、5、7、9、11、13、15均含有14C。如改用甲基含14C的乙酸,则分离的棕榈酸从α碳原子开始,间隔的碳原子2、4、6、8、10、12、14、16均含有14C,说明棕榈酸来自乙酸分子。 例3：用含14C标记的甘氨酸饲养大鼠,数日后杀死,探知其肝糖原具有放射性,可见甘氨酸可以在鼠肝变成糖原。 8）使用亚细胞成分的方法 应用超速离心技术,采用不同离心力场、离心速度、离心时间及分散溶媒的密度梯度,可将细胞内的细胞核、线粒体、核蛋白体、微粒体及无结构的上清液部分等亚细胞成分分开,再配合其他方法来研究亚细胞成分的代谢特点及各种代谢过程在细胞内进行的部位。 例如,用14C标记的氨基酸注射进大鼠体内,在注射后不同时间内杀死动物,取肝脏分离各亚细胞成分,并测定各成分中蛋白质的放射性,结果核蛋白体的放射性远高于其他成分。由此推测,氨基酸可在肝中掺入蛋白质,而且核蛋白体是肝中合成蛋白质的主要部位。 9）基