病原生物学-核病防治基础研究(下).pptVIP

现进入临床试验阶段的疫苗 重组BCG疫苗研究 重组BCG疫苗的优点 优良的佐剂和安全的载体 表达多个抗原表位 诱导持续的免疫记忆和高水平 的细胞免疫应答 综合各疫苗优势 重组BCG疫苗 安全的载体：以BCG为表达载体。 人型结核杆菌保护性抗原： Ag85B 和 ESAT-6，MPT64 等。 增强细胞免疫反应的细胞因子： IFN-r, IL-2, IL-12, G-CSF等。 构建重组BCG疫苗示意图 Aph pMV261/361 ESAT6 Ag85b IFNγ oriE Phsp65 连接 酶切 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅢ 重组BCG构建策略 P P P Aph pMV261/361 oriE Phsp65 BCG 转化 rBCG pMV261（染色体外） 与 pMV361（染色体内） oriE attp int Phsp60 Aph MCS pMV361 Phsp60 Aph oriE oriM pMV261 MCS attP attL 标志 基因 int attR 选择标志 外源基因 P 整合表达载体 X 分支杆菌 基因组 attB 整合、插入 X 切割、连接 选择 外源 P pMV361整合入染色体示意图 重组Mtb RD1-2F9 BCG疫苗免疫保护活性增强—细菌清除率改变 saline BCG BCG:RD1-2F9 saline BCG BCG:RD1-2F9 重组Mtb RD1-2F9 BCG疫苗免疫保护活性增强—脾脏组织观察 引自Pym AS. Nature Medicine, 2003; 9: 533 Ⅱ重组Mtb Ag85B BCG疫苗(rBCG30) 免疫活性增强—DTH反应增强 引自Horwitz MA. PNAS, 2000; 97(25):13853 rBCG30免疫保护性增强—体重变化 rBCG30 免疫保护性增强—肺脏和肝脏组织学观察 亚单位疫苗 结核蛋白/多肽疫苗概述 Koch治疗性疫苗实验 Peter Anderson 等发现结核杆菌培养基滤过蛋白（CFP）一定程度上具有保护小鼠感染结核的能力。这促使人们开始研究有效的亚单位疫苗。人们在早期培养滤液中发现具有明显免疫原性的蛋白质：Ag85复合体和ESAT-6。 结核蛋白质疫苗的难点在于免疫效率不够强和缺乏可用于人体的佐剂。 应用于预防的研究已较多。但应用于结核治疗的研究报道尚不多。 结核杆菌分泌蛋白和细胞壁蛋白是亚单位疫苗研究的主要对象。 结核培养滤液蛋白，尤其短期培养滤液蛋白免疫小鼠，具有保护效果，并证实保护效力来源于CD4+T细胞。 从培养滤液中分离鉴定出有免疫原性的蛋白质有：ESAT-6、Ag85B、Mtb8.4、Mtb32A、MPT64和一38kD蛋白（PstS-1）等。其中Ag85B免疫原性被认为最强。 近来的研究发现Ag85B和ESAT-6的融合蛋白免疫原性更强。 Mtb8.4具有较强的细胞免疫活性，免疫动物证明它具有很强的免疫活性。 The antigens selected for TB vaccine Yin-Yang Model Zhang Ying, Clin Pharmacol Ther. 2007;82(5):595-600. Traditional model Resuscitation, Replication, growth, death, Dormancy ESAT-6 Ag85B Mtb8.4 HspX Ag85B-MPT64（190-198）-Mtb8.4 (AMM) Ag85B-MPT64（190-198）-HspX (AMH) Persisters Reverts Dormant Replicating 30kD分泌蛋白(Ag85)的免疫原性 ——T细胞增殖反应 引自Sinha RK. Vaccine, 1997; 15: 689 亚单位疫苗的特点 环境分枝杆菌存在使BCG的预防保护作用大为降低，此时亚单位疫苗具有较好的免疫保护力。 免疫佐剂和细胞因子对疫苗的效应影响很大。 T细胞表位对于亚单位疫苗非常关键。疫苗通过特异性表位和特异性的T细胞作用，分别激活Th1和CTL。 可以作为治疗性疫苗。 引自Mustafa AS. Molecular Immunology, 2002; 39:113 T细胞表位 亚单位疫苗佐剂 亚单位疫苗需要有效的佐剂才能引起有效的免疫应答。传统的铝佐剂主要引起Th2为主的免疫应答，显然不适合以细胞免疫为主的抗结核疫苗。 理想的结核疫苗佐剂所具有的功能: (Ⅰ) 免疫调节 (Ⅱ) 抗原呈递 (Ⅲ) 诱导CTL反应 (Ⅳ) 靶向特异性细胞 (Ⅴ) 持久释放 抗原