细菌性阴道病联合测定试剂盒标准操作规程.docVIP

细菌性阴道病联合测定试剂盒干化学酶法原理 本品检测包括过氧化氢H2O2（阴道乳酸杆菌的标志物）、唾液酸苷酶（加德纳菌、游动弯曲杆菌等BV致病菌的标志物）和白细胞酯酶Leukocyte Esterase LE（炎性细胞的标志物）三项指标。 过氧化氢浓度测定 阴道液中过氧化氢经过氧化物酶作用，释放出新生态氧，后者在4-氨基安替比啉存在下，使3,5-二氯-2-羟基苯磺酸氧化呈红色或紫色，在反应系统中加入3,5-二氯-2-羟基苯磺酸的拮抗物，当样品中H2O2浓度≥2mol/L，反应结果呈红色或紫色，呈色深度与H2O2浓度成正比；样品中H2O2浓度＜2mol/L，反应结果呈蓝色。唾液酸苷酶活性测定： 唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐，释放出溴吲哚基，遇重氮盐起反应呈色，呈色深度与唾液酸苷酶活性成正比。 白细胞酯酶活性测定：白细胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐，释放出溴吲哚基，后者在有氧的条件下呈蓝色或绿色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。 组成BV Set反应装置：铝箔包装，有上中下三个反应孔，分别为H2O2、SNA、LE孔，20支。稀释液：MES [2-(N-吗啉代)乙烷磺酸]缓冲液：10mmol pH6.5、含NaCl 0.9%， 8m1/瓶，1瓶。显色液 ：固紫B盐 0.15% ，1.5m1/瓶，1瓶。无菌棉签20支、软塑料试管20个。使用说明书1份。样品采集和处理 受检者的准备取样品前24小时应禁止性交、盆浴、阴道灌洗及局部上药等，以免影响检查结果。经期样品会对结果判读有影响，所以不宜做该项检测。 样品的采集 受检者取妇科检查常规体位，使用棉签于阴道后穹窿处旋转10-20秒，以清晰见到棉签上有分泌物附着为准。如果使用的棉签太短或棉球太小都不能保证取得适宜的样品，这些都会影响到检测结果。建议使用厂商赠送的棉签，取样前棉签不得做任何处理，包括使用消毒剂及任何液体。如不使用厂商赠送的棉签，则保证棉签长度、棉球大小与厂商赠送的尽可能相同；保证棉签是经过高温消毒的，但不能用环氧乙烷消毒，。 样品的处理 将带有样品的棉签放入厂商赠送的软塑料试管中，加400μl稀释液或用稀释液滴瓶垂直滴加14-16滴，反复挤压棉签，使分泌物溢出。样品应及时检测，不能及时检测的样品应保存在2-8℃，但应在内完成检测。 仪器 微量移液器（100μl、1000μl） 恒温水浴箱（37℃）或干浴器,推荐使用恒温水浴箱。 操作步骤 将试剂盒从2-8℃取出，平衡到室温开始使用撕开铝箔包装，取出反应装置，轻轻揭掉反应孔上的铝箔条。 注： 开封后的反应装置，须避光放置，并在当天使用完毕。 在反应装置的三个孔中每孔滴加一滴处理过的样品，约35μl，以没过反应孔1/2为宜，之后在“唾液酸苷酶”反应孔中滴加一滴“显色液”。将反应装置放在37℃水浴箱中显色15分钟，判读结果。 如使用干浴器则严格按如下要求操作： a．使用的环境温度： 18-25℃ b．设定温度44~48℃，建议使用48℃ c．开机预热不少于10分钟 d．反应时间15分钟 检测完毕后，将试剂盒放回2-8℃保存。 特别提示：试剂盒各组分要求使用同批号产品。 结果判读 特别提示：反应结束后，应立即判读结果。 过氧化氢（反应装置上部的反应孔）：正常时显红色紫色蓝紫色；不正常时显蓝色。如显灰色或灰蓝色，则为样品稀释过度，建议重新采样或判读为正常。唾液酸苷酶（反应装置中部的反应孔）：不显色或黄色为阴性，显棕黄色为脓性、血性样品以及脓稠分泌物所致，应判读为唾液酸苷酶阴性；显红、紫色或蓝色为阳性，显蓝色表示唾液酸苷酶活性浓度很高。白细胞酯酶（反应装置下部的反应孔）：参照标准比色板。“-”和“±”表示白细胞酯酶阴性，“+”、“++”、“ +++”表示白细胞酯酶阳性。 技术参数 重复性：批内重复性：≥90% 批间重复性：≥90% 最低检出量 过氧化氢≥2μmol/L、唾液酸苷酶≥7单位/ml、白细胞酯酶≥9单位/ml检出符合率阳性参考品符合率过氧化氢2μmol/L 阳性率≥90%唾液酸苷酶7单位/ml阳性率≥90%白细胞酯酶9单位/ml阳性率≥90% 阴性参考品符合率过氧化氢﹤2μmol/L 阴性率≥90%唾液酸苷酶﹤7单位/ml 阴性率≥90%白细胞酯酶﹤9单位/ml 阴性率≥90% 使用条件 15℃～30℃，避免阳光直射。 贮存条件 2℃～8℃，避光保存。 有效期 一年。 参考文献中华人民共和国卫生部行业标准,WS/T 227-2002 临床检验操作规程编写求,2002-07-01。中华人民共和国卫生部医政司编，全国临床检验操作规程（第二版）。南京：东南大学出版社，1997。268。BRISELDEN A M．Sialidases(neuraminidases)in bact