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第三章 紫外-可见分光光度法（UV）Ultraviolet and visible spectrophotometry 第一节 紫外-可见吸收光谱 3.1.1 分子吸收光谱的形成 分子内部存在三种运动： 相应能级 a 电子的运动 电子能级?Ee(1-20 ev) b 分子内原子在平衡位置的振动 振动能级?Ev(0.05-1 ev) c 分子围绕自身重心的转动 转动能级?Er(小?Ev10倍以上) ?E=h?=hc/? 当?E=5 ev时，相应波长在250 nm，因此分子内电子的跃迁产生的光谱位于紫外可见光范围（200-800 nm）。 发生电子跃迁的同时，必然会发生分子振动和转动能的跃迁，由于转动能级差很小，相应的波长间隔只有0.1nm甚至更小。如此小的间隔使记录的谱线连在一起，使紫外可见光谱呈现带状光谱。 3.1.2 有机化合物的电子光谱 （一）跃迁类型 1. ???* 能量高，真空紫外区 2. n??* 远紫外、近紫外区 3. ???* 近紫外区 4. n??* 吸光系数小，禁阻区 （二）常用术语 1. 生色团:能吸收近紫外和可见光的基团和结构系统定义为生色团。 2. 助色团:基团本身不能吸收大于200nm的光，但与生色团相连时会使生色团的吸收峰向长波方向移动并使吸收强度增加。 3. 红移和紫移:在分子光谱中，因取代基或溶剂系统的改变使吸收带的最大吸收波长?max发生移动，向长波方向移动称红移，向短波方向移动称紫移。 在紫外可见光范围内无吸收的液体可以做样品的溶剂，如水、已烷等。 第二节 朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律 (一) 基本定律 Lambert定律: I=I010-kb 光被吸收的强度与光程b(cm)成比例. Beer定律: I=I010-kc 光被吸收的强度与待测溶液的浓度(mol/L)成比例. I0-入射光强度，I-透射光强度，K-吸光系数。 Lambert-Beer定律：I=I010-kbc 透射比：T=I/I0= 10-kbc， 负对数用A表示: log(1/T)=A=kbc A=?bc A称吸光度(无单位)，?为摩尔吸光系数，反映测量的灵敏度。 (二) 吸收光谱曲线 将不同波长的单色光依次通过待测溶液，分别测得不同波长下的吸光度A，以A为纵坐标，波长?(nm)为横坐标绘制的曲线称吸收曲线。 紫外吸收光谱曲线的表示方法 结 论 吸收曲线描述了物质对不同波长光的吸收能力，它反应了物质能级的变化情况，吸收曲线的形状和最大吸收波长的位置以及吸收强度等指标与分子的结构有密切关系。因此，利用吸收曲线可以对物质进行定性分析，利用某一波长下测得的吸光度与物质浓度关系的工作曲线，可以对物质进行定量分析，为了得到较高的灵敏度，一般测定?max处的吸光值。 相对分析：光度法采用的是相对分析方法。即仪器测得数据不能直接反映待测物质浓度，而是要从标准工作曲线上读出最后结果。其结果准确与否取决于标准物质的准确性。 朗伯-比尔定律的偏离 根据朗伯-比尔定律，吸光度A与浓度c 应成正比。但实际中会出现偏离朗伯-比尔定律的情况，因而影响了测定的准确性。 常见的偏离以负偏离居多，引起偏离的因素既与样品有关也与仪器有关。 1.* 样品的浓度，通常浓度小于0.01mol/L的稀溶液 中朗伯-比尔定律才成立。因为在高浓度时，由于吸光 质点间的平均距离缩小，邻近质点的电荷彼此间会产生 影响，以至改变它们对特定辐射的吸收能力，结果吸光 系数发生改变，导致朗伯-比尔定律偏离。 * 样品的透明度，当试样为胶体、乳状液或悬浊液时，其悬浮在溶液中的不溶物会对入射光产生反射或散射作用使透射光强因非吸收因素而减少，引起朗伯-比尔定律正偏离。 2. 引起朗伯-比尔定律偏离的溶剂因素 溶剂不但会对生色团的吸收峰高度和波长位置产生影响，还会影响待测物质的物理性质和化学组成，从而影响其光谱特性。 在选择溶剂时应注意： a 尽量选用低极性溶剂； b 溶解性好并且溶液具有良好的化学和光化学稳定性；c 溶剂在样品的吸收光谱区无明显吸收，没有吸收干扰。 3. 引起朗伯-比尔定律偏离的仪器因素 朗伯-比尔定律的适用条件是入射光必须为单射光。但为了满足实际测定中需要足够光强的要求，由光源发出的光不可能是单射光，而是由一小段波长范围的复合光。由于待测物质对不同波长光的吸收能力不同，就导致了对朗伯-比尔定律的负偏离。 第三节 紫外-可见分光光度计 1. 光源 钨灯和碘钨灯:使用范围340