实验一_磺胺嘧啶在体小肠吸收实验课件.pptVIP

实验一 磺胺嘧啶在体小肠吸收实验 药学系药剂教研室 一、实验要求 1.掌握大鼠在体肠管循环灌流法研究药物吸收的实验方法。 2.掌握药物肠管吸收的机理和计算吸收速度常数(ka)、吸收半衰期(t1/2（a）)的方法。 二、仪器、试剂和动物 （一）仪器 恒流泵、紫外分光光度计、石英比色皿、万分之一分析天平、电子秤（称大鼠）、恒温水浴、温度计、红外线灯、玻璃插管、2mL和10mL移液管、锥形瓶、烧杯、注射器、眼科剪刀、眼科镊子、普通中号镊子、小剪刀、动物实验操作台、手术线、手术纱布、10mL容量瓶、1000mL容量瓶、10mL带塞试管、量筒、手术止血钳 二、仪器、试剂和动物 （二） 试剂 磺胺嘧啶原料药、酚红、1%NaNO2溶液、0.5%氨基磺酸铵溶液、0.1%二盐酸萘基乙二胺溶液、1mol/L盐酸、0.2mol/L氢氧化钠、生理盐水、Krebs-Ringer试剂（pH7.4）、25%乌拉坦等。 （三）动物 大鼠，约200g，实验前禁食一夜（自由饮水） 三、实验原理 消化道药物吸收的主要方式为被动扩散。其透过速度与膜两侧的浓度差成正比，可用下式表示： Cp相对于CGI可忽略不计，若设DkS/h=k’上式可简化为 上式说明药物膜透过速度属于表观一级速度过程。 三、实验原理 以消化液中药物的量的变化率dX/dt表示透过速度，则： -dX/dt=kaX，积分后为 三、实验原理 Xn的求算 Xn=Cn×Vn 在小肠吸收过程中，药物被吸收的同时水分也被吸收，使Vn不断减少，利用酚红不被吸收，测定不同时间酚红的浓度，求算Vn。 四、实验内容 1．试剂的配制 Krebs-Ringer试剂(pH7.4) （已准备）：称取NaCl 7.8g，KCl 0.35g，CaCl2 0.37g，NaHCO3 1.37g，NaH2PO4 0.32g，MgCl2 0.02g，葡萄糖1.4g，加蒸馏水适量使成l000mL。 1%NaNO2溶液（100mL） 0.5%氨基磺酸铵溶液（100mL） 0.1%二盐酸萘基乙二胺溶液（200mL） 1mol/L盐酸（400mL） 0.2mol/L氢氧化钠（400mL） 四、实验内容 2．供试液与酚红液的配制（已准备） (1)供试液：精密称取磺胺嘧啶20mg、酚红20mg于1000mL容量瓶中，加Krebs-Ringer试剂定容，摇匀。 (2)酚红液：精密称取酚红20mg于1000mL容量瓶中，加Krebs-Ringer试剂定容，摇匀。 四、实验内容 3．循环实验的操作 (1)蠕动泵流速的调节：选择所需工作方向，按动快、慢档开关，调节流速为5mL/min和2.5mL／min。 (2)恒温水浴调节：水浴温度调节为（37±0.5）℃。 (3)供试液的准备：取80mL供试液加入循环装置的烧瓶中，见下图，将烧瓶置恒温水浴中预热至（37±0.5）℃。 (4)生理盐水的准备：取生理盐水适量，预热至37℃备用。 四、实验内容 (5)大鼠麻醉：取实验前禁食一夜、体重约为200g的雄性大鼠一只，按1.2g／kg体重腹腔注射乌拉坦（约0.8mL）麻醉，并固定于固定台上。 四、实验内容 (6)小肠两端插管：沿大鼠腹部中线打开腹腔(约3cm)，在十二指肠上部和回肠下部各切一小口，插入直径约0.3cm的玻璃管，并用线扎紧。 四、实验内容 (7)肠管洗涤：用注射器将37℃的生理盐水缓缓注入肠管，洗净肠管内容物。 注意： 先将肠管捋顺，确保无死结； 推注时不要太快，以免涨破肠管； 充分洗净后送入空气使洗涤液尽量流尽。 四、实验内容 (8)做成回路：将肠管两端的玻璃管按图所示与胶管连接，做成回路，开动蠕动泵，其流速为5mL/min。 四、实验内容 (9)取样：以5mL/min流速循环10min后，将流速调节为2.5mL/min，立即自供试液烧瓶中取样两份(1mL和0.5mL各一份)，分别作为SD和酚红“0”时间样品，另向烧瓶中补加酚红液2mL，其后每隔15min按同法取样及补加酚红液，共取样9次，停止循环。 四、实验内容 4．含量测定 （1）SD的标准曲线：取供试液2、4、6、8、10mL分别置l0mL容量瓶中，加蒸馏水定容。 四、实验内容 （2）酚红的标准曲线：精密称取酚红约25mg置250mL容量瓶中，加蒸馏水定容，分别精密吸取1、2、3、4、5、6mL置10mL容量瓶中，加蒸馏水定容，再分别吸取0.5mL置10