分剂量链脲佐菌素对糖尿病心肌病的病理学观察.doc.docVIP

　　分剂量链脲佐菌素对糖尿病心肌病的病理学观察 --糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一种严重的，复杂的代谢性疾病，全球约4%的人口催患该病。在发达国家己经达到流行病的比例回。中国糖尿病患者己高达9240万，而糖尿病前期的患者更是高达1. 48亿固。在人类，糖尿病与长期的心血管损伤相关，尤其是内皮功能障碍，纤维化和心肌病，增加了冠状动脉疾病、心脏衰竭、心肌梗死和死亡的风险团。化学试剂链脉佐菌素(streptozotocin，STZ)和四尿嚓咤能选择性地破坏胰腺日细胞，导致高血糖，是制备糖尿病并发症模型的重要工具。本研究利用STZ单次腹腔注射建立1型糖尿病性心肌病( Diabetic cardiomyopathy，DCM)大鼠模型，探讨STZ与DCM病理变化的剂量依赖效应，为DCM的治疗提供模型依据。 1材料与试剂 1. 1实验动物和分组 雄性SD大鼠32只，清洁级，由安徽医科大学实验动物中心提供，体重 220-270 g。实验前测每只大鼠的血糖值范围在3. 0-5. 0 mmol / L。将32只大鼠随机等分为4组:采用单次腹腔注射STZ制备糖尿病模型，组1 STZ剂量为50 mg/kg;组2剂量为55 mg/kg;组3剂量为60 mg / kg ;对照组腹腔注射柠檬酸三钠一柠檬酸缓冲液。 1. 2试剂和仪器 1. 2. 1试剂及主要溶液的配置 STZ(美国Sigma公司)，一20℃冻存;柠檬酸、柠檬酸三钠(天津市津宏化工有限公司生产)。将STZ冰浴、避光溶解于0. 1 mol /L的柠檬酸三钠一柠檬酸缓冲液中，制成浓度为10mg / mL的STZ液。其中柠檬酸三钠一柠檬酸缓冲液是由0. 1 mol几柠檬酸三钠母液和0. 1 mol几柠檬酸母液按体积比1 :1.32混合后调整pH值4. So1.2.2仪器One Touch稳豪型微量血糖仪及配套血糖试纸，美国强生公司;0. 22 um针孔滤器，德国Cor-ning公司。 1. 3造模方法 1. 3. 1给药途径和剂量 造模前，禁食不禁水12 h,称重。组1、组2、组3 STZ的注射剂量分别为50 mg/kg,55 mg/kg和60 mg/kg。对照组按55 mg/kg注射柠檬酸缓冲液。STZ液配置后注射时问限定在30 min内。为防止酮症酸中毒死亡，必要时注射短效胰岛素。 1.3.2糖尿病模型成功标准 注射STZ后72 h，尾静脉取血测空腹血糖和口服葡萄糖耐量试验(Oralglucose tolerance test OCTT)。以空腹血糖)11. 1mmol / L，且OCTT服糖后2h血糖,16. 7 mmol / L作为糖尿病大鼠成模标准。 1. 4取材及标本处理 造模3周后，10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，取材检测。取左心室心肌组织和胰腺置4%甲醛固定，梯度酒精脱水、二甲苯透明，石蜡包埋;连续切片，厚度为5 N,m。 1. 5 HE染色 对心脏和胰腺进行苏木素一伊红( hematoxylinosin staining， HE)染色，Olympus BX51型生物显微镜x 200镜下观察摄片。 1.6 Masson染色 心脏切片脱蜡至水后，放入Bouin、液37 0C温箱内作用2h，流水冲洗切片至黄色消失;asson染色 光镜下观察心肌细胞呈红色，胶原纤维呈绿色。对照组胶原纤维含量少，分布均匀，A;组2心肌内胶原组织明显增多，排列紊乱，分布不均，C;组1胶原组织含量比对照组增多，排列比组2稍显规整，见图3 B o Image Pro Plus 6. 0图像分析系统心肌组织胶原面积/总面积比值进行测定，结果表明，与对照组相比，组2大鼠心肌组织胶原相对含量明显增加(P 0. 05)， 3讨论 人类的糖尿病是一种全身代谢性疾病，逐渐进展引发各器官的损害并产生相应的并发症。DCM是由糖尿病引起的特殊性心肌病，对糖尿病患者的生存质量及预后有很大影响。DCM引起糖尿病患者广泛的心肌结构异常，如心室扩张、间质纤维化和心肌细胞肥大，并最终导致左心室肥大和舒张、收缩功能障碍。--br /通过给SD大鼠单次腹腔注射STZ，迅速制备了糖尿病模型，经过3周，产生明显的心肌病变，心肌细胞肥大、排列紊乱，胶原组织明显增多，分布不均。其中，55 mg/kg剂量组成模率高、病死率低、心肌病变明显，适合作为复制糖尿病心肌病模型的推荐剂量。 STZ为一种广谱抗菌素，具有抗菌、抗肿瘤的性能和致糖尿病的副作用，对实验动物的胰岛B细胞具有高度选择性。一次大剂量腹腔或静脉注射STZ可制备糖尿病模型。张春虹等研究发现，SD大鼠一次性腹腔注射链脉佐菌素，3周后可出现稳定的糖尿病心肌病状态。通过超声心动图观察活体心脏以及在离体心脏里，STZ诱导的糖尿病大鼠心脏舒张功能不全和收缩功能不全都是逐渐进展的。