第04章药物定量分析和分析方法验证.ppt

第四章  药物定量分析与分析方法的验证 样品（包括生物样品）的前处理 定量分析方法及验证内容 分析含金属或卤素、氮、硫、磷等元素的有机药物之前，需进行适当的样品前处理： 1.不经有机破坏的分析方法 2.经有机破坏的分析方法 比色法：供试品本身在紫外-可见光区没有强吸收，或在紫外光区虽有吸收，但为了避免干扰或提高灵敏度，加入适当的显色剂显色后进行测定。 色谱过程 固定相 1）色谱柱的理论板数（n） n值越大柱效越高，应高于规定的最小理论板数 2）分离度（R） R值越大分离效果越好 在规定的条件下，注入对照液或供试液，记录色谱图，按下式计算待测峰（定量峰）与相邻峰的分离度。除另有规定外，应大于1.5。 3）重复性 考察测量的精密度 在规定条件下，取一定量的对照液，连续进样3～5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0％。 RSD计算公式 4）拖尾因子（T） 考察色谱峰的对称性 T 值越接近于1.0 色谱峰的对称性越好，测量的准确度越高。采用峰高法测量时，应检查待测峰的T是否符合规定。除另有规定外，T应在0.95～1.05之间。 ▲选择适宜的物质作为内标物，以待测组分和内标物的峰高比或峰面积比求算试样含量的方法称为内标法。内标法的关键是选择合适的内标物。 ▲校正因子（f ） 其含义为：内标物峰面积与其浓度之比（As/Cs）是对照品峰面积与其浓度之比（AR/CR）的多少倍。 第三节 药品质量标准分析方法验证 一、目的 证明所用的分析方法适合相应的检验要求 四、验证指标 准确度 精密度 专属性 检测限 定量限 线性 范围 耐用性 （一）准确度 该法测定结果与真实值或参考值接近程度 用百分回收率%表示 （二）精密度 *重复性 同人、仪器、时间 *中间精密度 同室，但不同人、仪器、时间 *重现性 不同地方协同检验 （三）专属性（选择性） 在有其他成分（杂质、降解产物、辅料等）可能存在时，该分析方法对待测组分准确而专属的测定能力 （四）检测限LOD 样品中待测组分能被检测出的最低量 是限度试验参数，无需定量测定。常用%、ppm、ppb表示。 仪器分析法 检测限（D） 灵敏度（S） 噪音 （N） （五）定量限 LOQ 样品中被测组分能被定量测定的最低量（应达到一定的准确度和精密度） 常用%、ppm、ppb表示 非仪器分析法 用已知浓度的样品确定定量限，将测定结果计算准确度和精密度 仪器分析法 按信噪比10:1时的相应浓度或进样量为定量限 （六）线性 是指在一定范围内，样品浓度与检测结果的线性关系 （七）范围 指在达到一定精密度、准确度和线性的条件下，该方法适用的高低浓度或量的区间 （八）耐用性（粗放性） 指测定条件稍有变动时，测定结果不受影响的承受程度 鉴别 仅需专属性、耐用性 重复性 中间精密度 重现性 √ 测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。 回收率％＝ ×100％ 数据要求 规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。 原料药用已知浓度的对照品测定，或将本法测定结果与另一已建立准确度的方法的测定结果相比。 制剂用已知量的被测物混合物测定，或与另一已建立准确度的方法的测定结果相比。 1. 含量测定方法的准确度 2. 杂质定量测定的准确度 向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。 偏差（d） 标准偏差（SD）相对标准偏差（RSD） 变异系数（CV） 同一均匀样品，经多次取样测定，所得结果之间的接近程度 鉴别反应、杂质检查、含量测定方法均应考察 或 把低浓度样品信号与空白样品信号进行比较，按信噪比（S/N）3:1或2:1时的相应浓度或进样量为检测限 非仪器分析法 能观察到实验现象的最低浓度为检测限 N LOD: S/N=3 LOQ: S/N=10 （最小二乘法） 线性回归 y ＝ a + bx 相关系数 r 接近1越好 标准曲线的制备