牛卵母细胞及胚胎的玻璃化冷冻研究.pdfVIP

牛彝母捆艟及珏骆的玻璃亿冷冻研宄 第一章 文献综述 哺乳动物卵母细胞及胚胎低温保存研究进展 细胞及胚胎低温保存做了大量的研究工作。1972年W曲廿n曲锄等人首次报道了慢速冷 冻法，不但将操作时间缩短到了30n血之内，而且方法简易，设备简单，容易在生产中 推广使用，为卵母细胞及胚胎的冷冻保存提供了有效手段，因而目益受到人们的重视， 成玻璃化液冷冻小鼠成熟卵母细胞，解冻后形态正常率达87％，将形态正常的卵母细胞 利用化学毒性较低的乙二醇为主体冷冻保护剂，主要对小鼠桑椹胚进行玻璃化冷冻保 存。在室温f仅需0．5—5分钟平衡后直接投入液氮中，其生存率达98％，但此方法对 囊胚期以后阶段的胚胎保存效果不佳。1992年Ful【ll等【刀以丙二醇为主要冷冻剂，用慢 速冷冻法对牛成熟卵母细胞冷冻保存，解冻后经体外受精其卵裂率达16％，囊胚发育率 达至4 细胞，受精后的卵裂率为18％～22％，但囊胚发育率仅为O．9％～4．8％。上述方法皆采 pulled s妇w)法冷冻牛卵母细胞取得了一定进展，体外受精后囊胚发育率达“％～25％。 体外可继续发育。经过移植后，玻璃化法冷冻、解冻妊娠率为24％，常规冷冻、解冻妊 娠率为28％。IVP胚胎直接培养并用于移植屠作为对照，有26％的建立了妊娠。虽然对 照的妊娠率比期望值要低，但是这些数据说明低温保存胚胎可能不会影响IvP胚胎在体 内的发育。最近，很多研究致力于家畜卵母细胞和胚胎的玻璃化冷冻保存。 新疆农业丈学碗t俐，Z生论文 1．1卵母细胞冷冻保存意义及其发展状况 1．1．1卵母细胞冷冻保存的意义 卵母细胞的冷冻保存技术已经应用在医学、动物学和生物医学等方面，其意义具体 来说有以下几个方面：(1)哺乳动物卵母细胞的有效冷冻保存是护品种资源和拯救濒危动 物不可缺少的技术保障之一。(2)是加快家畜品种改良和胚胎移植技术产业化的重要组成 部分，它可代替活畜进口，且不受时间和空间的限制。(3)通过卵母细胞的冷冻保存，对 研究卵母细胞的低温生物学特性和体外受精机理有着重要意义。(4)通过冷冻保存卵母细 胞，不但可以建立雌性动物的基因库，还可以充分利用丰富廉价的卵母细胞资源，使体 外受精、转基因及克隆等技术的研究应用不受时问和地域的约束。(5)在医学方面，人卵 母细胞的冷冻保存可以克服胚胎冷冻保存所引起的伦理道德以及法律匕的问题，为那些 接受化疗、放疗或由于其它病理原因而过早摘除卵巢或输卵管堵塞病人提供怀孕的机会 112l。 1．1．2卵母细胞冷冻保存的发展概况 保存后受精，移植后得到了后代。随后，舢一H鹤aⅡ等f14】对兔卵母细胞冷冻保存后受精， 移植后也得到了后代。家畜的卵母细胞冷冻保存主要集中在牛上，um等115】首次成功冷 冻保存了牛的卵母细胞，且第一头超低温冷冻保存的卵母细胞产生的牛犊出生于1992 年。虽然牛卵母细胞的冷冻方法借鉴了胚胎的冷冻方法，但是其效果远不及牛胚胎的冷 straw)法冷冻牛卵母细胞取得了成 冻。1998年，Vajita等19j首次采用oPs(openpulled (．210℃)的方法，取得了20％的囊胚率并获得一头健康小牛。与成熟卵母细胞相比， 未成熟卵母细胞的冷冻更为困难。suzuki等f订谰慢速冷冻法冷冻牛Gv期卵母细胞，体 卵母细胞冷冻的进展缓慢。最近国内也有一些关于Gv期卵母细胞冷冻的进展，2004 48．2％，只有OPs法得到了4％的囊胚率。牛卵母细胞冷冻的研究主要集中在玻璃化方 法的应用和寻求减少冷冻液体积和加快降温速率的方法上，在低温生物学机理和探讨冷 牛帮母细照及疑艟匏玻璃化坶冻磺甓 冻损伤的机理方面傲的还不够，因此，卵母细胞的冷冻保存条件及低温生物学特性等方 面还有待进一步研究四l。 Y0ng等I捌首次用玻璃化冷冻方法冷冻人成熟卵母细胞，获得了第一例来自玻璃化冷冻 方法的后代。最近研究人员通过理论和试验分析比较了人卵母细胞冷冻和胚胎冷冻的优 Andrea认为随着卵母细胞冷冻技术的发展，人卵母细胞的冷冻可以作为胚胎冷冻的一种 选择。nd【eH24】等从社会、伦理和建立“卵子库”的意义等方面分析也认为人卵母细胞 的冷冻将是未来人工辅助生殖技术发展的方向。 1．2胚胎冷冻保存意义及其发展状况 1．2．1胚胎冷冻保存的意义 在繁殖生物学技术的应用中，胚胎的冷冻保存是关