姜飞洲mir125b通过下调抑癌基因tp53inp1促进ii型子宫内膜癌的增殖和迁移课件.pptVIP

* MiR-125b通过下调抑癌基因TP53INP1促进II型子宫内膜癌的增殖和迁移 姜飞洲1 刘特2 贺银燕3 严沁1 陈晓悦1 王慧1 万小平1* ? 1.上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院； 2. 同济大学生命科学与技术学院； 3.上海交通大学附属第一人民医院妇产科. 子宫内膜癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，子宫内膜癌分为I型与II型，所有子宫内膜癌复发患者中II型占50%，子宫内膜癌引起的死亡患者中II型占44%，五年生存率依旧15% (Gehrig and Bae-Jump, 2009; Hamilton et al., 2006) miRNAs与肿瘤发生发展密切相关(Huang et al., 2008; Kota et al., 2009，Pedro et al., 2010) 研究背景 miR-125b在ER(-)的II型子宫内膜癌细胞中表达水平明显高于I型，差异具有统计学意义 研究背景 qRT-PCR检测结果显示，miR-125b在II型子宫内膜癌细胞中表达高于I型，尤其在AN3CA细胞中高表达最为明显，差异具有统计学意义（左下图） northern blotting检测结果与qRT-PCR相一致，miR-125b在II型子宫内膜癌细胞中高表达（右下图） I型与II型子宫内膜癌细胞中miR-125b表达 I型与II型子宫内膜癌组织中miR-125b表达 qRT-PCR证实miR-125b在II型子宫内膜癌组织中高表达 采用CCK8细胞增殖实验分析miR-125b 表达改变后子宫内膜癌细胞增殖能力 与阴性对照组和未处理组相比，外源性miR-125b表达促进ishikawa细胞的增殖，差异具有统计学意义（*P0.05 vs. 阴性对照组、未处理组）（右上图） 与阴性对照组和未处理组相比，下调miR-125b表达抑制AN3CA细胞的增殖，差异具有统计学意义（*P0.05 vs. 阴性对照组、未处理组）（右下图） MiR-125b促进子宫内膜细胞增殖 子宫内膜癌细胞划痕实验结果 右上图为外源性miR-125b表达显著增加ishikawa细胞的迁移能力，miR-125bm组48h已愈合划痕，然而阴性对照组和未处理组在同一时间点不能愈合划痕 右下图为下调miR-125b抑制AN3CA细胞的迁移能力，阴性对照组和未处理组48小时已几乎愈合划痕，然而miR-125bi组在同一时间点不能愈合划痕 MiR-125b促进子宫内膜癌细胞迁移 Transwell 迁移实验结果（下图）与划痕结果一致，外源性miR-125b表达促进ishikawa细胞的迁移能力，下调miR-125b抑制AN3CA细胞的迁移能力，差异具有统计学意义（*P0.01 vs. 阴性对照组、未转染组) MiR-125b稳定表达细胞株建立 构建miR-125b表达质粒，经测序比对确定构建成功，左下图红色方框为miR-125b成熟序列 miR-125b表达质粒转染ishikawa细胞，经嘌呤霉素帅选后转染效率达80%以上（右下图） 裸鼠荷瘤实验 下图为裸鼠荷瘤实验第2~6周三组肿瘤体积生长曲线，从第3周开始，miR-125b质粒组肿瘤体积增长速度明显大于阴性对照组和未转染组，差异具有统计学意义（*P0.01 vs. 阴性对照组、未转染组） 右上图为第六周处死裸鼠，取瘤体称重，miR-125b质粒组瘤体重量明显大于阴性对照组和未转染组，差异具有统计学意义（*p0.01 vs. 未转染组、阴性对照组） 右下图为第六周肿瘤大体形态，miR-125b质粒组肿瘤体积明显大于阴性对照组和未转染组 HE染色显示内膜癌组织大体形态和ishikawa癌细胞的异型性（下图，上一排） 检测增殖指数ki67表达，miR-125b质粒组表达为（+++），阴性对照质粒组和未转染组表达均为（+）（下图，下一排） 应用生物信息学技术预测miR-125b靶标 Targetscan Pictar miRanda 148 靶标选择 与增值和迁移相关抑癌基因 START domain containing 13 (STARD13) Bcl-2修饰因子(Bcl-2 modifying factor, BMF) 腺瘤息肉病基因APC(adenomatosis polyposis coli , APC) 肿瘤P53诱导核蛋白1（tumor protein p53 inducible nuclear protein 1, TP53INP1） MiR-125b负性调节TP53INP1蛋白表达 应用Western blot检测转染后72小时子 宫内膜癌细胞中TP53INP1蛋白表达 与未转染组和阴性对照组相比，miR-1