用实时荧光定量PCR检测石蜡标本中的麻风菌DNA以提高课件_2.ppt

用实时荧光定量PCR检测石蜡标本中的麻风菌DNA以提高PB患者的确诊水平 温 艳*1 杨荣德 2 谭福跃2 邢 燕1 袁联朝 1 李桓英1 1 首都医科大学附属北京友谊医院 北京热带医学研究所 100050 2 云南省文山州皮肤病防治所 663000 1873，麻风病是由感染麻风杆菌造成的慢性传染病,挪威 A. Hansen.从病人组织中发现麻风菌 1943，氨苯砜类药物用于麻风病的治疗 1958，WHO 成立了麻风防治机构,全球麻风病控制工作统一计划 1981，WHO 推荐联合化疗方案. 麻风病 麻风菌在人体感染的过程 卜 亚临床感染 无临床症状 自我痊愈 过程 MB PB LL BL BB BT TT 亚临床阶段 中间发展过程 临床变化 分型 目前麻风已经不再是一种灾难。1985年，122个国家中520万人感染此病；1991年WHO提出：到2000年消除麻风作为一个公共卫生问题，指标为：1/10000，世界范围总数少于6000000个病例；2005年，全球麻风病人降到3000000，目前，2000000病人，这主要归功于1980年推广的MDT联合化疗。 存在问题 全球麻风病每年病人数徘徊不变，在过去的8年，非洲、美洲和亚洲每年超过200000病人，提示：麻风病的传播没有阻断，主要障碍是在哪里发生和如何传播的信息不清楚；不能有效的早期诊断病人。 麻风流行现状 Screening Tests S o u r c e No. Registered Effective Date English Chinese Ⅰ Microscopy Diagnostic Criterion for Leprosy 2008.01-16 WS 291-2008 2008-01-16 √ Slit Skin Smear Acid-fast staining Ministry of Public Health, Beijing √ Ⅱ Histo-pathology Skin Biopsy in Leprosy, D.S. Ridley, CIBA-GEIGY, Ltd., Basle, Switzerland Third Edition,1990 1990 √ Ⅲ Leprosy ELISA IDRI, Seattle, WA98104 I-AS-005 2010-12-06 √ √ Ⅳa Whole Blood (IFN-r) Assay IDRI, Seattle, WA98104 I-AS-006 2006-01-05 √ √ b ELISPOT T-SPOT.TB, Oxford Immunotec TH-TB-UK-V4 2008-04 √ √ Ⅴ Nested-PCR Thomas M.S., J. Clin. Microbiol, 1990 Wen Yan, Am. J. Trop. Med. Hyg., 2013 pp. 1913-1917 in press 2011-11-06 √ √ Ⅵ Real Time PCR Truman RW, PLoS Negl Trop Dis, 2008 2(11):e328 2012-10-22 √ √ 麻风病早期诊断的 实验室技术平台 研究背景 麻风病诊断：病理组织检查和抗酸染色结合临床检查； 病理学检查包括病原学检查抗酸菌（ AFB）、组织中病理变化； 然而常规病理学检查（HE）存在特异性、敏感性不足，特别是对查菌阴性、病理表现为非特异性改变的患者。 PCR技术用于皮损活检和组织液的检测，可检出新鲜未固定组织标本中的微量麻风菌DNA，对早期和疑难病例的诊断有潜在优势。 研究背景 本实验室已经建立了Nested PCR和real time PCR方法： Yan Wen, Xing Yan, Yuan Lian-Chao, Rong De Yang，Fu Yue Tan,Ying Zhang and Li Huan-Ying. Application of RLEP Real Time PCR for detection of M.leprae DNA in Paraffin-embedded Skip Biopsy Specimens for Diagnosis of Paucibacillary leprsy. Am. J. Trop. Med. Hyg., 90(3), 2014, 524–529 Yan Wen, Xing Yan, Yuan Lian-Chao, Liu Jian, Ying Zhang and Li Huan-Ying.