徐元宏加强微生物监测提高抗感染治疗水平(研究生)课件_2.ppt

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徐元宏加强微生物监测提高抗感染治疗水平(研究生)课件_2

(4)液体稀释法确证: 培养基: CAMHB 药物浓度: 头孢他啶0.25-128μg/ml, 头孢他啶/克拉维酸0.25/4-128/4μg/ml和头孢噻肟0.25-64μg/ml,头孢噻肟/克拉维酸0.25/4-64/4μg/ml。确证试验需要同时使用头孢他啶、头孢噻肟,单独和联合克拉维酸复合制剂。 接种: 按标准肉汤稀释法的规定进行 孵育条件: 35℃空气 孵育时间: 16-20小时 结果判读: 对2个中任何一个药物的MIC,在加入克拉维酸后,MIC与不加克拉维酸的MIC值降低3个以上对倍稀释度,判定为ESBLs(如头孢他啶的MIC=8 μg/ml,头孢他啶/克拉维酸的MIC为1 μg/ml)。 质控建议:肺炎克雷伯菌ATCC700603:联合克拉维酸的复合制剂的MIC与单药的MIC相比,应当降低3个以上对倍稀释度。 治疗原则是:1.碳青霉烯类抗生素,2. β-内酰胺类/酶抑制剂,3.氨基糖苷类抗生素如阿米卡星,4.头霉烯抗生素如头孢西丁。在超广谱β-内酰胺酶 检测条件不具备的地方,临床可以通过实验室报告的作推测治疗,若药敏报告提示三代头孢例如头孢泼肟、头孢他啶、氨曲南、 头孢噻肟、头孢曲松有二者以上耐药极有可能是产超广谱β-内酰胺酶 。 4、D试验-克林霉素诱导耐药试验 : 葡萄球菌对大环内酯类抗生素耐药表现为:①由msrA基因介导的主动外排机制,即M型耐药;②抗生素作用靶位的改变,即由erm基因编码的RNA甲基化酶对细菌核糖体50S亚基23SrRNA进行特定核苷酸残基甲基化,使药物与靶位的结合能力下降,导致对具有相同靶位的大环内酯类、林可酰胺类、链阳菌素B三类药物同时耐药,临床称为MLS型耐药。体外药敏试验又可将MLS型分为结构型(cMLS型)和诱导型(iMLS型);cMLS型为红霉素和克林霉素均耐药;iMLS型红霉素耐药、克林霉素敏感。 对大环内酯耐药的葡萄球菌可能对克林霉素的耐药,通过erm 基因编码的23S rRNA 甲基化也称为MLSB(大环内酯、林可和B 型链阳霉素)耐药,或只对大环内酯类耐药(由msrA 基因编码的外排机制)。 M-H平板或血平板,纸片相邻试验,对于葡萄球菌,距红霉素纸片(15μg/片)边缘15~26mm 处放置克林霉素纸片(2μg/片)来进行检测;对于β-溶血链球菌,将克林霉素纸片(2μg/片)和红霉素纸片(15μg/片)贴在相邻的位置,纸片边缘相距12mm。 35℃空气,16-24h孵育后,克林霉素抑菌环不出现“截平”现象,应报告分离株对其敏感。邻近红霉素纸片侧克林霉素抑菌环出现“截平”现象(称为“D”抑菌环),提示存在可诱导的克林霉素耐药,应报告分离株对其耐药,在报告中应注明“通过诱导克林霉素耐药试验,推测此菌株对克林霉素耐药,克林霉素对某些病人可能仍有效”;若无“截平”现象,则应报告菌株对克林霉素敏感。 谢谢! 革兰阴性球菌主要依据氧化酶、DNA酶、生化反应来鉴别,淋球菌氧化酶阳性、DNA酶阴性、葡萄糖阳性、乳糖阴性、麦芽糖阴性、甘露糖阴性、蔗糖阴性;脑膜炎奈瑟氏菌氧化酶阳性、DNA酶阴性、葡萄糖阳性、乳糖阴性、麦芽糖阳性、甘露糖阴性、蔗糖阴性。革兰阳性杆菌主要依据菌体、菌落,特征性染色来鉴别,结核分枝杆菌抗酸染色阳性,白喉棒状杆菌Albert染色出现异染颗粒,产单核李斯特菌溶血性和动力。革兰阴性杆菌主要依据氧化酶、氧化-发酵(O-F)试验来判断。 氧化酶阴性、氧化-发酵(O-F) 发酵 肠杆菌科编码 补充生化反应鉴定到种。对于致病性大肠埃希菌、志贺菌、沙门菌还需血清学凝集。 氧化酶阴性、氧化-发酵(O-F) 氧化 非发酵菌编码 氧化酶阳性、氧化-发酵(O-F) 氧化/- 补充生化反应鉴定到种。 氧化酶阳性、氧化-发酵(O-F)发酵 弧菌科编码 补充生化反应、血清学凝集鉴定到种,如霍乱弧菌O1、O139等。 对于真菌而言,主要依据菌体形态、菌落形态、色素, 同化试验、发酵试验来鉴别至种属。 实验室人员困惑:由于上述细菌、真菌鉴定依靠表型特征,表型是受基因控制,同一基因型可能有不同种表型,同一表现型可能受不同基因型所控制。根据表现型判断的菌体能代表真正的菌属吗?随着分子生物学的发展,人们能任意改造表现型。我们能有所作为吗? 三、恰如其分报告药敏结果 药敏试验中药敏纸片选用:临床医生经常反映,实验室所报告的药敏试验

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