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烹饪原料中大豆卵磷脂研究分析 　　摘 要：本文主要研究了超声波辅助法萃取大豆粉中的卵磷脂的工艺条件及HPLC-ELSD检测样品中卵磷脂的含量，确定最佳工艺条件。利用响应面分析法对超声波提取大豆卵磷脂的工艺进行优化。在单因素试验基础上，选择超声温度、超声时间、液料比和溶剂浓度为自变量，以大豆卵磷脂提取率为响应值，采用中心组合设计的方法，研究各自变量及其交互作用对卵磷脂提取率的影响。利用Design Expert 8.0.5.0分析确定最佳提取工艺，得出超声波提取大豆卵磷脂工艺的最佳条件为超声水浴温度50 ℃、液料比35:1 、超声功率100W 、超声时间50min。在此条件下，卵磷脂提取率为5.4mg/g。 　　关键词：卵磷脂；超声波提取；响应面分析；HPLC；检测 　　本实验以超声波辅助法萃取大豆粉中的卵磷脂，HPLC-ELSD检测大豆卵磷脂含量。通过单因素实验及在此基础上用Design Expert 8.0.5.0设计试验，分析确定最佳提取工艺，为工业化生产大豆卵磷脂提供参考数据。 　　1、材料与方法 　　1.1试验材料 　　大豆：品种为“千金豆” 　　大豆卵磷脂标准品：纯度99.99%，美国sigma公司 　　无水乙醇：北京化工厂 　　电热鼓风干燥箱：型号：DHG-9075A上海一恒科学仪器有限公司 　　高速万能粉碎机：功率460W天津市泰斯特仪器有限公司 　　分析天平：型号AL2041 梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司 　　超声波清洗机：型 号：KQ-500DE 超 声 功 率：500（W） 　　离心机：H-1850R长沙湘仪离心机仪器有限公司 　　超纯水机:AWL-1002-U 艾科浦高端超纯水专家公司 　　HPLC仪:日本津岛公司的LC-20A系统,配有ELSD检测器,SCL-10A系统控制器, 　　1.2试验方法 　　1.2.1萃取原理及工艺流程 　　超声波萃取原理：利用超声的空化效应、机械振动、热效应等多重作用,在流体内产生瞬间的高温高压场,对流体中的固体表面产生强大剪切力,加速天然活性成分的溶出和强化传质过程,从而能促进传质分离过程。 超声波提取工艺流程：40℃恒温干燥—粉碎—过筛—称量—加入乙醇—超声—静置—离心—微滤—超声脱气—冻存。 　　1.2.2实验设计 　　1.2.2.1单因素实验设计 　　表1 单因素实验设计 　　1.2.2.2 Design Expert 实验设计 　　根据单因素实验结果，Design-Expert 8.0.5.0分析软件的Box-Behnken设计试验，选择重要因素进行响应面优化试验设计，得出重要因素之间的交互作用及最佳工艺条件。 　　1.2.3 检测 　　优化检测条件，对标准样品和制备样品进行HPLC-ELSD 检测，制作校准曲线，得出制备样品中卵磷脂含量。 　　1.2.4 计算 　　卵磷脂得率=纯卵磷脂质量/大豆粉质量（mg/g） 　　2、实验过程及结果分析 　　2.1超声波辅助萃取卵磷脂 　　精确称取1.000g豆粉,装入50ml离心管中，按照实验设计加入乙醇，振荡混匀,在超声萃取条件下萃取一定时间。超声完毕后，在室温下静置冷却一定时间，离心5min后，制备样品液。 　　2.2样品液制备 　　用一次性注射器吸取离心管上清液，用0.45μm 的有机相过滤头过滤，注射到冻存管中，放入-18℃冰箱保存待用。 　　2.3标准液的配制 　　准确称取大豆卵磷脂标准品12.1 mg，置于10ml 的茶色容量瓶中，用色谱乙醇定容，配成卵磷脂含量 1.21 mg/mL 的大豆卵磷脂标准液，过0.45μm 的有机相过滤头，保存在冻存管中，-18 ℃保存待用。 　　2.4大豆卵磷脂检测 　　2.4.1 流动相的配制 　　准确量取异丙醇（色谱级）550ml，正己烷（色普级）280 ml， 过0.45 μm 的有机相滤膜，混合于一溶剂瓶中，超声20 min；在超纯水机上接取10ml电导率为 18 Ω·cm 的超纯水，置于溶剂瓶中，超声脱气20 min。 　　2.4.2色谱条件 　　正相高效液相色谱法:瑞典Kromasil silica 100-5色谱柱(250mm×4.6 mm ID, 5 μm填料粒度);V(异丙醇)/V(正己烷)/ V(水)=55/28/10体系为流动相,流速为0.8mL/min；柱温31℃。 　　蒸发光散色检测器（ELSD -3300）参数：空气流速 2 L/min；漂移管温度 60 ℃；增益 2。 　　2.4.3大豆卵磷脂检测及结果分析 　　2.4.3.1标准曲线的绘制 　　吸取2 ml的大豆卵磷脂标准液Ⅱ过 0.45μm 的有机相滤膜，置于干净冻存管中，准确吸取冻存管中的溶液1μL、2μL、6μL、8μL、10μL ，12μL分别进样，按色谱条件进样分析检测。以卵磷脂