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反复快速皮肤扩张对皮瓣EGF表达影响 　　摘要：目的 研究反复快速扩张方式的扩张机理。方法 62只雄性新西兰大白兔随机分为ABCDE五组。各组于不同时期取扩张皮肤标本进行HE染色及EGF免疫组织化学染色对比观察。SPSS11.5统计软件进行统计学处理。结果 组织学观察：AC两组在不同维持期组织学表现接近。B组在维持期1-3周均有大量胶原纤维断裂，且表皮层厚度增加不明显。DE两组无区别。EGF结果 在维持一周ABC表达无差异，维持两周AB无差异但两组均与C组有显著差异，维持4周三组表达无差异。结论 反复快速皮肤扩张可能通过促进组织细胞合成与分泌EGF来提高扩张皮肤的修复质量；反复快速皮肤扩张方式可以有效缩短皮肤扩张修复治疗疗程。 　　关键词：皮肤扩张术；软组织扩张器；免疫组织化学 　　中图分类号：R322.99 文献标识码：A 文章编号：1004-4949（2013）03-00-02 　　皮肤软组织扩张术[1]目前作为常规治疗方法在临床广泛应用，但其扩张机理仍不十分明确。本研究拟采用一种新型的扩张方式探讨其扩张机理及临床应用的可行性。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及分组 　　62只6月龄雄性新西兰大白兔，体重2-3Kg，由河北医科大学动物实验中心提供（冀医动管字610063）。分笼饲养统一饲料自由饮食。随机分为5组，A组20只为反复快速扩张组，以取材时间点随机分为5组每组4只；B组20只为快速扩张组同上分为5组每组4只；C组16只为常规扩张组同上分为4组每组4只；D组5只为对照组同上分为5组每组1只；E组1只为正常对照组。 　　1.2 动物模型制备 　　2.5/L戊巴比妥钠（25mg/Kg）耳缘静脉注射全身麻醉。自两耳根后缘连线间横行切开，钝性分离至两侧眶骨上缘1cm，前部距鼻翼2cm处。植入肾形扩张器（植入前注射无菌生理盐水检查有无渗漏）埋入颈部皮下，严密缝合。自注射壶注入无菌生理盐水5ml。术后即刻肌注庆大霉素8万单位并每日肌注8万单位至术后3天。扩张器植入3天后开始扩张。 　　A组：每日扩张1次，每次注入无菌生理盐水20ml维持30min，抽出全部，维持3小时，重复3次，最后一次抽出15ml，每日重复。10日完成扩张；B组：每日扩张1次，每次注入无菌生理盐水5ml，10日完成；C组：每3日扩张1次，每次注入无菌生理盐水5ml，30日完成；D组：单纯埋入扩张器，不扩张皮肤；E组：不进行任何干涉。 　　1.3 标本采集与处理 　　A、B组分别于扩张完成后维持期1、2、3、4及6周随机抽取4只取标本；C组于维持期1、2、3、4周随机抽取4只取标本；D组于扩张1、2、3、4、6周随机抽取1只取标本。于采集时间点A、B、C组全麻下自扩张皮瓣中央处切取1cm×1cm大小的扩张全层皮肤组织；D组自扩张器位置中央处切取4块0.5cm×0.5cm大小的全层皮肤组织块；E组于动物头顶中央处切取4块0.5cm×0.5cm大小的全层皮肤组织块，均置入10%甲醛溶液中固定备用。 　　1.4 光镜观察 　　标本于60%、70%酒精脱水1小时（h），80%酒精脱水过夜，90%、95%、100%酒精脱水各1h，二甲苯透明两次各1h，常规浸腊两次各1h，石蜡包埋切片，二甲苯脱蜡，酒精梯度下行入水，自来水漂洗，苏木精染色5min，漂洗，1%稀氨水反蓝30秒，漂洗，伊红染色5min，漂洗，酒精梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 　　1.5 表皮生长因子（Epidemal growth factor，EGF）免疫组织化学染色 　　采用链霉卵白素-辣根过氧化物酶复合物（SP）法：石蜡切片常规脱蜡至水，PBS清洗3次，3%甲醇-双氧水室温下孵育5-10min，蒸馏水冲洗，PBS（PH7.4）缓冲液冲洗5min，枸橼酸盐缓冲液微波抗原修复98℃20min。自然冷却至室温，PBS冲洗5min，滴加10%正常山羊血清封闭游离的结合位点，滴加1：75稀释的一抗EGF，4℃孵育过夜。PBS冲洗3次，每次5min，滴加生物素标记的二抗IgG工作液，37℃水浴箱内孵育30min，PBS冲洗3次，每次2min，滴加辣根过氧化物酶HRP标记的链酶卵白素（三抗），37℃水浴箱孵育30min，PBS冲洗3次每次5mim。滴加DAB显色剂显色5min，自来水冲洗中止显色，苏木素复染2min，常规酒精梯度脱水，二甲苯透明后封片，阴性对照用PBS替代一抗，余步骤同上。 　　1.6 结果分析 　　EGF阳性标准：EGF表达部位为胞浆胞核内棕黄色颗粒或黄褐色颗粒。在扩张皮瓣中EFG在表皮基底、毛囊及皮脂腺均有强烈表达，在血管内皮细胞及成纤维细胞也可见表达。采用计算机图像分析系统在400倍下，分析染色阳性细胞个数测定所占比例，以阳性细胞染色的积分光