妊娠期肝内胆汁淤积症中miR—200c表达及其临床意义.docVIP

妊娠期肝内胆汁淤积症中miR—200c表达及其临床意义 　　[摘要] 目的 考察miR-200c在妊娠期肝内胆汁淤积症患者中的表达及其在妊娠期肝内胆汁淤积症中的作用。 方法 提取51例妊娠期肝内胆汁淤积症患者及30例同期正常妊娠妇女外周血RNA，qRT-PCR检测miR-200c的表达。 结果 miR-200c在妊娠期肝内胆汁淤积症患者中表达为（0.48±0.24），明显低于正常妊娠妇女中的表达（1.12±0.35）。血清miR-200c水平与妊娠期肝内胆汁淤积症患者的年龄、经产与否、孕周、胎数无关，但是与围产儿预后相关。 结论 血清miR-200c在妊娠期肝内胆汁淤积症的诊断和围产儿预后预测中可能发挥重要作用。 　　[关键词] 妊娠期肝内胆汁淤积症；miR-200c；临床意义 　　[中图分类号] R714.25 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）23-0034-02 　　众所周知，miRNA成为分子生物学研究热点，人类miRNA充当瘤基因或抑瘤基因的作用调控其靶基因的表达及相关信号通路，在肿瘤的发生、发展和转归过程中发挥重要作用[1-4]。研究表明，miR-200c在乳腺肿瘤中表达下调[5，6]。miRNA-200c通过抑制ZEB1来增强RASSF1A表达，进而抑制表皮细胞向间质细胞转化过程[7]。结果提示miR-200c表达下调可能在疾病的发生发展中具有重要作用。妊娠期肝内胆汁淤积症（intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP）是一种在妊娠期出现瘙痒及黄疸为特点的疾病，其早产率及围生儿死亡率高，其发病原因尚未完全阐明。本研究旨在分析miR-200c在ICP患者中的表达及在ICP中的临床作用，从miRNA的角度探讨ICP的进展。 　　1 资料与方法 　　1.1 临床资料 　　以2010年1月～2012年6月在我院诊断为妊娠期肝内胆汁淤积症的孕妇51例为研究组，年龄21～37岁，孕周32+1～41周。配对同期住院30例正常产妇作为对照组，年龄21～39岁，孕周31+5～41周。 　　1.2 实验材料 　　mirVana PARIS试剂盒（用于提取血清总RNA）购自美国Ambion公司，miRNA逆转录（RT）试剂盒购自美国Promega公司，miR-200c的qRT-PCR检测试剂盒购自上海吉玛制药技术有限公司。 　　1.3 妊娠期肝内胆汁淤积症的诊断依据[6] 　　①中晚期妊娠有全身瘙痒，伴或不伴有黄疸，排除其他皮肤疾病或药敏性皮炎；②血清胆汁酸≥16 μmol/L，或者血清丙氨酸和天冬氨酸氨基转移酶31 U/L；③分娩后症状及体征消失；④排除其他肝脏疾病。 　　1.4 标本的采集及血清总RNA的提取 　　与患者签署知情同意书后，采集外周血样本5 mL。采血后需来回轻晃抗凝管，让血液与管壁的抗凝剂充分接触，动作轻柔以防溶血，1 000 r/min离心10 min，将上层血清转移至无酶管，再以10 000 r/min离心10 min，吸取上层血清于无酶管，-80℃冻存备用。血清总RNA的提取按照mirVana PARIS试剂盒说明书进行。 　　1.5 血清miR-200c表达水平的检测 　　①RT反应：反应体系为20 μL，包括5×RT缓冲液4 μL、25 mmol/L镁离子3 μL、10 mmol/L三磷酸脱氧核苷0.75 μL、40 U/μL RNA酶抑制剂0.25 μL、1 μmol/L miR-200c特异性RT引物1.2 μL、200 U/μL莫罗尼鼠白血病病毒RT酶0.2 μL、RNA 1 μg，无酶水加至20 μL。反应条件：16℃ 30 min，42℃ 30 min，再以85℃ 10 min灭活RT酶，产物-20℃冻存备用。②qRT-PCR反应：反应体系为20 μL，包括稀释后的RT产物2 μL、2×qRT-PCR缓冲液10 μL、5 μmol/L miR-200c特异性PCR引物0.4 μL、5 U/μL耐热DNA聚合酶0.2 μL、灭菌双蒸水7.4 μL。反应条件：先95℃ 3 min活化Tag酶，然后95℃ 12 s、62℃ 35 s，共40个循环。 　　1.6 统计学分析 　　用SPSS 13.0软件，采用t检验，P 0.05）。血清miR-200c在有围产儿早产、死胎、死产的妊娠期肝内胆汁淤积症患者中的表达显著下调，与围产儿正常的妊娠期肝内胆汁淤积症患者相比，差异有统计学意义（P = 0.001）。见表1。 　　3 讨论 　　妊娠期肝内胆汁淤积症是一种以妊娠期出现瘙痒及黄疸为特点的重要的妊娠期并发症。妊娠期肝内胆汁淤积症的早产率及围生儿死亡率高，其发病原因虽未完全阐明，但通过大量的流行病学材