微柱凝胶卡式法与试管法在ABO新生儿溶血病检测中对比分析.docVIP

微柱凝胶卡式法与试管法在ABO新生儿溶血病检测中对比分析 　　【摘要】 目的：探讨微柱凝胶卡式法对新生儿溶血病（HDN）的诊断价值。方法：选取2012年7月-2013年7月本院儿科收治的疑似ABO母婴血型不合新生儿溶血病的278例新生儿血标本，分别用微柱凝胶卡式法和传统试管法进行直接抗人球蛋白试验、间接抗人球蛋白试验和放散试验，并对检测结果进行比较。结果：278例中临床确诊263例。微柱凝胶卡式法的直接抗人球蛋白试验阳性率76.4%明显高于试管法的59.3%，抗体游离试验阳性率90.5%明显高于试管法的66.2%，抗体放散试验阳性率99.2%明显高于试管法的79.1%，差异均有统计学意义（P 　　【关键词】 微柱凝胶卡式法； 试管法； ABO； 新生儿溶血病 　　新生儿溶血病（Hemolytic disease of the newborn，HDN）是指母婴血型不合引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病[1]。临床上其实验诊断依据主要是“三项试验”，即红细胞抗人球蛋???试验、血清游离抗体试验和抗体放散试验[2]。三项试验主要是检测新生儿血清中是否含有红细胞抗体或红细胞是否致敏，提高三项试验的敏感性及特异性，对优生优育和新生儿溶血病的早期准确诊断有十分重要的意义[3]。微柱凝集试验作为一种免疫学检测的新技术，是一种新的改良抗球蛋白试验技术，在发达先进的国家已成为常规的血清学检测技术，近年来在我国输血领域已逐步作为常规应用。本院2012年7月-2013年7月采用微柱凝胶卡式法及传统试管法对拟诊的278例ABO血型不合新生儿溶血病患儿进行平行检测，并进行比较分析，现报告如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 血标本来自2012年7月-2013年7月在本院儿科初步诊断疑似ABO母婴血型不合新生儿溶血病的278例患儿。新生儿出生时间0.5～7 d，平均（4.8±2.5）d，其中男142例，女136例。患儿多在出生后1～7 d内，临床表现为出现黄疸和贫血、高胆红素血症、血红蛋白降低，伴有新生儿溶血病的临床症状和体征。 　　1.2 仪器与试剂 标准抗A、B血清试剂和标准A、B、O红细胞由上海血液生物医药有限公司生产，多特异性抗人球蛋白试剂、单特异性抗-IgG、单特异性抗-C3购于上海市血液中心。微柱凝胶检测卡、试剂、37 ℃免疫微柱孵育器、低速离心机、加样机及自动判读机由达亚美公司提供。 　　1.3 方法 首先分别鉴定母亲及新生儿抗凝血作ABO及Rh血型，然后对患儿血标本分别应用微柱凝胶卡式检测法及流式细胞仪法进行HDN三项试验，即直接抗人球蛋白试验（DAT）、抗体游离试验及抗体放散试验，同时设立阴、阳性对照，进行质控。 　　1.3.1 试管法 HDN三项试验严格按照《临床输血技术规范》进行操作。具体步骤：将受检红细胞用生理盐水洗涤3次，配成3%～5%的红细胞悬液。取红细胞悬液1滴加广谱抗人球蛋白试剂2滴，离心观察结果（直抗试验）；取试管3支，分别标记A、B、O，每管加入患儿血清/放散液2滴，按标记分别加入A、B、O试剂红细胞1滴，37 ℃孵育1 h后，用生理盐水洗3次，加入抗人球蛋白试剂2滴，离心观察结果（游离/放散试验）。 　　1.3.2 微柱凝胶卡式法 （1）直接抗球蛋白试验：取新生儿静脉血，离心，取压积红细胞，用生理盐水洗涤3次后配制成约0.5%～1%的红细胞悬液，取50 μL红细胞悬液加入微柱凝胶孔，离心5 min（2000 r/min），判读结果，微柱凝胶卡式法以红细胞聚集在凝胶带上部或凝胶中部为阳性反应。（2）血清游离抗体试验：取微柱凝胶卡在相应位置分别加入标准A、B、O红细胞各50 μL，再各加入患儿血清50 μL，置37 ℃孵育15 min，离心10 min（2000 r/min），判断结果，阳性同上。（3）释放试验（热放散法）：取洗涤4次的压积红细胞500 μL置试管中，加等量生理盐水，放入56 ℃水浴中孵育10 min，取出后立即离心（2000 r/min）5 min取上清液即为放散液，在微柱凝胶孔上分别加入标准A、B、O红细胞各50 μL，随后各加入放散液50 μL，将此卡置孵育器37 ℃孵育15 min，取出放入低速离心机离心3 min（1500 r/min），判定结果，阳性同上。 　　1.4 HDN检验判断标准 3项试验同时阳性可确诊；不同时阳性时以放散试验阳性为诊断标准；直接抗球蛋白试验和/或血清游离抗体阳性，而放散试验阴性，结合临床具体分析[4]。 　　1.5 HDN临床诊断标准 （1）母婴血型不合；（2）曾有死胎或有分娩原因不明的黄疸、贫血、水肿儿史；（3）新生儿有不同程度的黄疸、贫血、肝脾肿大，出生后2 d内有黄疸，2～4 d达高峰，血清胆红素205 μmol/L，有高胆红素