1.1《DNA重组技术基本工具》教学课件.ppt

退出 目录 1.DNA的基本组成单位: 脱氧核苷酸 鸟嘌呤脱氧核苷酸 腺嘌呤脱氧核苷酸 胞嘧啶脱氧核苷酸 胸腺嘧啶脱氧核苷酸 脱氧 核糖 含氮碱基 磷酸 A G C T 2.脱氧核苷酸的种类： 知识重温：DNA分子的结构 氢键 平面结构 立体结构 A T G C T A C G 磷酸二酯键 3.DNA分子的结构 * 限制酶的识别序列有何特点？ 限制酶识别序列的特点 中轴线两侧的DNA上碱基呈反向对称，重复排列 如：GAA TTC CCC GGG CTT AAG GGG CCC 中轴线 1、EcoRⅠ（大肠杆菌的一种限制酶）能识别GAATTC序列，并切割G和A之间的磷酸二酯键。 2、SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并切割C和G之间的磷酸二酯键。 常用的两种限制酶 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 什么叫黏性末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA的末端带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的末端叫黏性末端。 SmaⅠ 平末端　　　平末端 什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA的末端是平整的，这样的末端叫平末端。 平末端　　　平末端 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来。 E·coli DNA连接酶或T4DNA连接酶 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 氢键 T G C G A T A C 磷酸二酯键 T A C G T G C A DNA聚合酶的作用：把单个脱氧核苷酸连接到DNA片段末端。 磷酸二酯键 DNA连接酶的作用：将两个双链DNA片段连接起来。 1.载体需要的条件： ⑴有1~多个限制酶切点（便于外源基因的插入） 　⑵对受体细胞无害 　⑶导入基因能在受体细胞中复制、表达 　⑷有某些标记基因，便于筛选 　⑴作为分子运输车——载体，如果没有切割位点将会怎样？ 　⑵霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？ 　⑶假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？ 　⑷目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？ 三、“分子运输车” ——基因进入受体细胞的载体 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 标记基因将来可用含青霉素的培养基鉴别。 2、基因工程中常用的载体——质粒 质粒是一种裸露的、结构简单独立于细菌拟核之外、具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。 ⑴质粒 ⑵γ噬菌体的衍生物、某些动植物病毒等 2、基因工程中常用的载体 退出 目录