免疫学实验实六肥达试验.pptVIP

实验六 主要内容 ☆ 操作：肥达试验 ☆ 示教：肠道杆菌、霍乱弧菌 ☆ 录像：肠道杆菌 ※ 肥达试验 原理：用已知的伤寒沙门菌菌体(O)抗原和鞭毛(H)抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清做试管凝集实验 目的：测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验 器材： 试管6支/人，试管架1个/2人 吸管1支/人，标签1张/人 4人/组 伤寒杆菌H抗原 伤寒杆菌O抗原 甲型副伤寒杆菌H抗原 乙型副伤寒杆菌H抗原 待检： 病人血清（1:10稀释） 注意事项： 1、请同学们小心拔下橡胶乳头，如橡胶管和乳头分离，请装好再归还回来。 2、请最后观察完结果，同学们把标签撕掉再归还试管！ 3、H、O、副甲、副乙菌液里面的滴管不能混淆乱放！ 4、所有的玻璃物品使用时请轻拿轻放，切勿打坏！ 3、吲哚（靛基质）试验 有些细菌分解色氨酸生成吲哚（靛基质），与加入的二甲基氨基苯甲醛反应生成玫瑰吲哚呈玫瑰红色为阳性；黄色为阴性。 SS琼脂平板 双糖铁培养基 生化反应表 三、霍乱弧菌 Vibrio cholerae 实验报告 示教片：肠道杆菌（1张）、霍乱弧菌（1张）、 肥达试验：原理、步骤、结果与分析 * * 1. 每管加入0.5ml生理盐水 2. 倍比稀释血清: 在第一管中加0.5ml待检血清 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml弃去 操作步骤： 3. 每管加入0.5ml菌液 4. 震荡混匀后，置43℃，2hr后观察结果 2. 倍比稀释血清: 在第一管中加0.5ml待检血清 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml弃去 抗体稀释度： 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 阴性对照 抗体稀释度： 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 阴性对照 3. 每管加入0.5ml菌液 以出现＋＋凝集的血清最高稀释倍数为该血清抗体效价 O达到1:80，H达到1:160 H甲或H乙达到1:80或以上有诊断意义 ※ 结果判断 第6管 均匀混浊 ＋ 少量凝集 ＋＋ 细菌部分沉于管底，液体半澄清，凝集呈颗粒状 ＋＋＋ 大部分凝集，液体轻度混浊，凝集块较大 ＋＋＋＋ 全部凝集，液体澄清，大片凝集块 记录结果 * 吸管放桶，试管放锅 血清稀释度 菌液 乙副H 甲副H 伤寒O 伤寒H 效价 1:640 1:320 1:160 1:80 1:40 1、糖发酵试验 由于细菌各自具有不同的酶系统，故对糖（醇）类的分解能力不尽相同。 产酸产气：指示剂变色，小倒管内有气泡； 以＋ 表示 产酸： 指示剂变色；以＋表示 不能分解 ：指示剂不变色；以－表示 指示剂为溴甲酚紫 一、细菌生化反应 1.Negative 2. Positive 3. Positive and gas produced 2、硫化氢试验 硫化氢遇铅盐或铁盐形成黑色硫化铅或硫化亚铁沉淀物。 positive negative 4、尿素酶试验 有些细菌具有尿素酶，能分解尿素形成大量的氨，使培养基pH上升，而变成碱性，使含有酚红指示剂的培养基呈红色为阳性；不变色为阴性。 二、肠道杆菌： 1、肠道杆菌形态（G—）； 2、肠道杆菌常用分离鉴别培养：SS琼脂平板； 3、肠道杆菌的生化反应： 小生化管：大肠、变形、伤寒、痢疾 双糖铁培养基：大肠、变形、伤寒、痢疾 胆盐 枸橼酸盐 煌绿 乳糖 蛋白胨 中性红 抑制杂菌生长 被非致病菌分解产酸 被致病菌分解产碱 酸：红 碱：黄 上层 （固体） 下层 （半固体） 乳糖 硫酸亚铁 酚红 葡萄糖 － ＋ ＋ － － － － ⊕ 变形 － － －/＋ ＋ ＋ ＋ － ⊕ 伤寒 － － － － ＋ － － ＋ 痢疾 ＋ － － － ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ 大肠 靛 尿素 H2S 蔗 甘 麦 乳 葡 *