实验三 水中菌总数的测定及菌落计数 环境微生物学实验课件.pptVIP

实验的目的与意义 学习水样的采集， 细菌总数的测定方法， 了解平板计数的原则， 掌握无菌操作的基本方法。 实验原理与内容 实验原理与内容 自来水 水中细菌浓度较小，可直接进行平板菌落计数， 移取1mL水样加入平皿中，注入培养基， 进行24小时培养后，根据长出的菌落数计算每毫升水样中细菌的个数。 实验原理与内容 湖水（主校区校内湖） 水体中细菌浓度相对较大，需经过稀释再进行平板菌落计数。 稀释时取三个浓度梯度，各移取1mL水样加入平皿中进行平板计数。 计数时选取平均菌落在30-300之间的培养皿计算菌落数，再根据稀释倍数换算细菌总数。 操作步骤与注意事项 采集水样 自 来 水：灼烧3分钟，水流5分钟 自然水体：10-15cm深处，具塞广口瓶瓶口向下入水，翻转，开盖，盛满后，加盖取出。 操作步骤与注意事项 以下无菌操作均应在酒精灯附近进行 稀释水样（用于自然水体，10-1，10-2，10-3） 1mL水样加入9mL无菌水中 10倍稀释液，用于接种平板计数 1mL的10倍稀释液加入9mL无菌水中 100倍稀释液，用于接种平板计数 操作步骤与注意事项 稀释示意图 操作步骤与注意事项 水样接种（自然水体与自来水相同） 微量移液器吸取1mL水样加入培养皿中 涂布:自来水（2个平行样）、湖水原液、 10-1，10-2，10-3稀释液 共6个平板 涂布可从低浓度向高浓度依次涂布 操作步骤与注意事项 菌落的培养 标记方法：班级-组号-3（实验三）-自；班级-组号-3-稀释度 倒置培养 37℃恒温培养箱 24小时 操作步骤与注意事项 菌落计数 选取平均菌落数在30-300之间的培养皿计数。 根据菌落数和该平行样的稀释倍数计算水样的细菌总数（个/mL）。 操作步骤与注意事项 特定情况下菌落计数方法 有两个稀释度的平均菌落数在30-300之间 所有稀释度的平均菌落均大于300 所有稀释度的平均菌落均小于30 所有稀释度的平均菌落均不在30-300之间 操作步骤与注意事项 菌落计数的几种情况 操作步骤与注意事项 实验结束后，请老师清点实验仪器。 做好原始记录 下次实验时观察计数。 实验报告 目的 原理（自己的语言） 步骤（突出重点） 结果（按表格完成） 讨论（分析结果、分析误差出现原因、回答思考题等） * 实验三 水中细菌总数的测定 稀释10倍 100倍 1000倍 10000倍 100000倍 原液 倾注平板法和涂布平板法 30500或3.1×104 12 305 无法计数 6 270或2.7×102 15 11 27 5 513000或5.1×105 513 1650 无法计数 4 27110或2.7×104 60 271 2890 3 37750或3.8×104 46 295 2760 2 16400或1.6×104 20 164 1365 1 10-3 10-2 10-1 菌落总数 (CFU/mL) 不同稀释度的平均菌落数 例 次 * * *