应用微生物学实一 微生物菌种的分离纯化.pptVIP

应用微生物学实验 刘小红 xhliu@zju.edu.cn 实验室安全 进入实验室必须遵守实验室的各项规定，严格执行相关的操作规程； 使用高压蒸汽灭菌锅、干燥箱等一些易造成火灾或爆炸事故的设备时，必须有人值守； 实验室必须保持整洁，实验室门不能无人敞开，最后离开实验室的人员必须检查门窗是否关闭，切断水源和电源； 不能穿拖鞋或凉鞋上课，不准带进食物、饮料、口香糖进入实验室，实验室内不得从事与实验无关的事情。 实验准备 在实验课前预习相关实验内容，由于微生物培养是连续的，因此需要学生事先准备相关药剂，培养基，使用器皿，或定期进行相关检测观察。 实验过程 实验过程中思考实验设计的科学性、实验操作的合理性、时间分配的有效性； 分组实验时同学间要协调配合。 实验报告 每一个单独实验需要完成一个实验报告，连续的发酵实验完成一个总实验报告，实验报告撰写要规范，包括实验目的、原理、材料与方法、结果与分析等部分，数据真实可靠。 考核方式 考勤、实验过程和实验报告进行考核。 课程内容（一） 培养基的配制及灭菌 细菌、放线菌、真菌常用培养基的配制和高压蒸汽灭菌 微生物的分离与纯化技术 从自然环境中分离微生物菌株 原核微生物形态和结构观察 观察细菌、放线菌的菌落特征和形态结构 真核微生物形态和结构观察 观察真菌菌落特征和形态结构 微生物菌种保藏 用常用简易保藏法和冷冻真空干燥保藏法保藏微生物菌种 微生物生长 血球计数板直接计数法和比浊法测定微生物生长 抑菌活性微生物的筛选 从已分离菌种中筛选出能产生抑菌活性物质的菌株 生长抑制性物质的活性测定 对生长抑制性物质进行活性测定 课程内容（二） 纤维素酶、液化型淀粉酶、蛋白酶产生菌初筛 从已分离菌种中筛选出能产生纤维素酶、液化型淀粉酶、蛋白酶的菌株 纤维素酶、液化型淀粉酶、蛋白酶活力的测定 对纤维素酶产生菌、淀粉酶产生菌、蛋白酶产生菌的酶活力测定 微生物发酵条件优化I 单因素培养基筛选合适的碳氮源 微生物发酵条件优化II 均匀试验设计筛选合适的发酵培养基 发酵菌种的诱变选育 用诱变育种筛选高产菌种 液体通气搅拌发酵 学习有氧发酵的一般工艺及通用机械搅拌发酵罐的使用，了解典型的发酵过程，测定发酵过程中各种生理指标 实验一 微生物菌种的分离纯化 一、实验目的 1、学习培养基的配制； 2、学习从自然环境中分离微生物菌株； 3、熟悉无菌操作技术。 二、实验原理 工业微生物菌种最初都来自于自然界，土壤是微生物生长的大本营。但是自然界中微生物种类繁多，而且都是混居在一起的，要获得发酵菌株，首先必须把它们从混杂的微生物群体中分离出来。 在自然界中，微生物的种类很多，数量很大，为了获得单个菌体，首先必须把要分离的材料进行适当的稀释，按微生物生长所需要的条件，使其在平板上，由一个菌体繁殖成单个菌落，这样，就能从中挑选出所需要的纯种。由于细菌、放线菌和霉菌所要求的营养条件不同，利用不同的培养基制成平板进行分离，然后从菌落形态上的差异，可以把细菌、放线菌和霉菌三大类群区分并可计算出其数量，分别接种到试管斜面上，然后，在平板上反复进行分离培养，最后可获得纯种。 分离微生物菌株最基本的方法是稀释法。将样品放在无菌水中，通过振荡，使微生物悬浮于液体中，然后静置一段时间，由于样品沉降较快，而微生物细胞体积小沉降慢，会较长时间悬浮于液体中。通过对微生物悬浮液的进一步稀释和选择性培养，就可以分离出我们需要的目的菌株。 作为工业发酵菌株必须具备的基本特征： 能在廉价原料制成的培养基上迅速生长，并能生成较多的发酵产物； 培养条件如温度、渗透压等易控制； 抗杂菌的抗噬菌体能力强； 遗传稳定性高，不易退化； 不产生有毒有害的生理活性物质或毒素（食品和医药微生物） 三、实验器材与试剂 1. 器材 高压灭菌器，恒温干热干燥箱，超净工作台，天平，磁力搅拌器，电磁炉，移液器，混匀器 1 mol/L HCl，1 mol/L NaOH，无菌水（50mL 5个）、 100mg/L制霉菌素、100mg/L硫酸链霉素、100mg/L氨苄青霉素 量筒、玻棒、三角瓶、15mL具塞试管、无菌培养皿、2mL冻存管、冻存管架、tips、牛皮纸等 样品 植物根围土壤样品；植株 培养基 营养琼脂培养基：蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCl 10g，琼脂 20g，加水至1000mL，pH 7.2-7.4 高氏一号培养基：可溶性淀粉20g，KNO3 1g，K2HPO4 0.5 g, MgSO4? 7H2O 0.5g, NaCl 0.5g, FeSO4 ? 7H2O 0.01g，琼脂20g，加水至1000mL，pH 7.2-7.4 马铃薯葡萄糖培养基（PDA）：马铃薯（去皮）200g，煮沸30min后过滤，滤液中加葡萄糖20g、琼脂20g，补水至1