黑曲霉酸性蛋白液态发酵实验.docVIP

2014级生物工程专业实验(II) 黑曲霉液态发酵生产酸性蛋白酶 一、实验目的 掌握液态耗氧发酵的一般工艺，熟悉机械搅拌发酵罐及相关设备的原理和使用。 二、实验材料 2.1菌株 黑曲霉Aspergillus niger SZ-357，由发酵与酶工程研究室分离。 2.2 实验试剂 糊精、酵母膏、氯化铵、磷酸二氢钾、CaCl2、酪蛋白、酪氨酸、20%三氯乙酸，3,5-二硝基水杨酸(DNS)。 2.3 实验设备 DHP-9082电热恒温培养箱；2112型恒温摇床；GL-20G-II高速冷冻离心机；BIOTECH-5BG发酵罐，静音无油空气压缩机、BILON-T-501低温冷却液循环系统；722S型分光光度仪；SW-CJ-2FD型净化工作台；HZS-H 超级恒温水浴锅；Sartorius 分析天平。 三、角蛋白酶液态发酵实验 3.1 工艺流程 3.2培养基及培养条件 3.2.1种子培养基及培养条件 （1）液体种子培养基及培养条件：糊精1%，酵母膏4%，氯化铵3%，KH2PO4 0.03%，CaCl2 0.5%，pH 7.0，121oC 灭菌15 min。将斜面菌种接种于含有100 mL种子培养液的500 mL三角摇瓶中，在34oC，180 r/min的恒温摇床中振荡培养24 h。 (2)麸皮固体种子培养基及培养条件：将斜面菌种接种于含水90%的麸皮固体培养基中，34oC，静置培养72 h