铜氨基酸螯合物的合成与DNA作用的研究实验报告.docVIP

分类号 密级 UDC 专业设计实验 铜(II)氨基酸螯合物的合成及其表征研究 学生姓名 王晓彤 学 号 030212008070 指导教师 张前前 侯进 专业 应用化学 年级 08化学 同组者 王倩 中国海洋大学化学化工学院（ 铜(II)氨基酸螯合物的合成及其表征研究 【实验背景及原理】 铜、锌等是生命体中最重要的微量元素，具有多种重要生物功能。α-氨基酸是人体蛋白质等与生命有关的单元物质，具有羧基和氨基，可与Cu (II) 、Zn(II)等过渡金属离子形成MLn(n=1-3)螯合物。不同组成和结构的铜、锌氨基酸螯合物具有不同的生物活性，其中ML2型铜、锌氨基酸螯合物因其生物稳定性、易被消化吸收、生物学效价高等特性而成为第三代微量元素饲料添加剂。目前国内微量元素氨基酸螯合物产品主要为铜、锌等微量元素的甘氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、苏氨酸螯合物，但实际生产在质量控制上存在问题，并且微量元素氨基酸螯合物在生物体中的代谢、与DNA的作用等尚不明确。因此，本实验研究Cu(Ⅱ)-氨基酸螯合物的快速合成方法，并以光谱法研究其与DNA的作用。 【仪器与试剂】 仪器：紫外-可见分光光度计（岛津UV-2550型，配备1cm石英比色皿）；红外光谱仪（Nicolet-ATAR360型）；pH计（雷磁pHS-3B）；磁力加热搅拌器（1个）；回流冷凝管（1个）；50mL圆底烧瓶（1个）；用做水浴的100mL烧杯(1个)；50mL烧杯（2个）；微量进样器（Thermolabsystems Finnpipette 1-5μL ；5-50μL；200-1000μL；1-5mL等规格）；干燥器（2个）；抽滤装置；滴管、玻璃棒数个。 试剂：甘氨酸 (Gly)；邻菲罗啉（Phen）；CuCl2?；鲑鱼精DNA；pH缓冲剂[已配好]； Na2HPO4；氢氧化钠；盐酸；无水乙醇等均为分析纯，光谱实验用Milli-Q水。 【实验过程】 1、螯合物的合成 称取CuCl2晶体0.5mmol（0.14g），邻菲罗啉1.0mmol（0.20g），甘氨酸1.0mmol（0.08g），将Gly用蒸馏水溶解并加氢氧化钠调节其pH至7，将CuCl2、phen分别用蒸馏水、乙醇溶解在50ml小烧杯中，待其完全溶解后将二者混合，之后将其倒入盛有Gly的小烧杯中，混合均匀开始水浴加热回流约1个小时。 2、螯合物表征 测的mp.、IR。IR：KBr压片，Nicolet-ATAR360型红外光谱仪；铜（II）-甘氨酸混配螯合物 表二 配体及配合物主要红外吸收频率 谱图分析： 由复合氨基酸铜Cu-phen-gly的红外光谱和表二可见，Gly由羰基的伸缩振动引起的特征吸收由1610nm处红移到1667nm处，这是羧基氧参与配位的结果；由phen芳环上的上δC-C、δC-H振动引起的特征吸收由854nm、740nm向低波数段迁移至851.46nm、726.92nm，表明phen参与了配位。所以该配合物是由Cu-gly-phen三者螯合而成。 3.紫外光谱的测定结果 3.1DNA纯度检查及浓度测定 波长/nm 吸光度 260 1.1829 280 0.6465 表三DNA在260nm和280nm处的吸光 结果分析：（1）A260/A280=1.831.8,表明DNA纯度达到实验要求。 （2）浓度c=A/(100εb)=1.79×10-6mol/L。 3.2DNA与铜-氨基酸-邻菲罗啉的作用 编号 波长/nm 吸光度 加入30μL DNA前 Ⅰ 268.5 2.4749 加入30μL DNA前 Ⅱ 225.5 2.8166 加入30μL DNA后 Ⅰ 268.0 2.5300 加入30μL DNA后 Ⅱ 225.5 2.4710 表四铜-氨基酸-邻菲罗啉的最大紫外吸收 结果分析：（1）出现两个吸收峰，表明已生成铜-氨基酸-邻菲罗啉配合物。 （2）加入DNA后，225.5nm处的吸光度值下降，说明配合物与DNA发生插入作用，产生减色效应。 减色率：H=（Ao-Ab）/Ao=12.3% 减色率的大小在一定程度上反映配合物与DNA作用的强弱。 （3）加入DNA后，Ⅰ吸收峰发生紫移，而理论上只可能发生红移，