第九篇原生质体融合原理技术应用.pptVIP

青蒿素（一种抗疟有效成分，具有抗白血病和免疫调节功能）冠瘿瘤又称为根瘤 植物细胞培养 植物细胞培养基本原理 及主要实验技术 生物合成药物 历史沿革 基本原理 主要实验技术 01 1、早期尝试期 2、基础研究期 营养 3、新技术建立时期 原生质体融合 植物细胞固化 质粒转化原生质体 体细胞克隆与变异 4、植物生物技术期 与基因工程结合 产业化 02 灭菌 培养基 培养 保存 02 1植物材料 灭菌前处理、表面灭菌剂、内感染 2培养基 湿热、过滤 3器皿和工具 干热、湿热、火焰灼烧 4培养室 5无菌技术 超净工作台 100级 灭菌 02 水 双蒸水以上 无机盐 大量 微量 有机成分 碳源 蔗糖 葡萄糖 氨基酸 几种常用的 有能力合成，但刺激生长 产物合成前体 多种混合 维生素 有能力，但不够 几种常用的 培养基 02 生长调节剂 生长素 细胞激动素 促进分裂 打破顶芽休眠 促进茎的分化 赤霉素和脱落酸 不确定成分混合物 其他物质 琼脂 活性炭 去除植物细胞产生的 酚类、氧化物、丹宁 PH 灭菌前5-6 培养基 02 仪器设备 常用仪器设备 培养器皿和设备 实验室设置 培养条件 温度 低于植物生长温度3-4 光照 用于分化的细胞和光自养型细胞 氧 培养类型 愈伤组织 生长迅速 疏松 非褐化 单细胞培养 悬浮细胞培养 大量培养 发酵罐 生物反应器 植物细胞与微生物比较 固定细胞培养 特点 转化细胞培养 培养 03 愈伤组织培养 单细胞培养 悬浮细胞培养 大量培养 固定细胞培养 转化细胞培养 细胞保存 03 愈伤组织培养 1外植体的选择 外植体的来源 部位 年龄 生理状态 外植体的大小 2培养基的配制 培养基的配制 大量成分 微量成分 有机成分 铁、激动素 按比例混合 调酸碱 定容 分装 灭菌 定容后加琼脂 融化 定容 培养基的选择 外植体 培养基 生长素 激动素四因子 3愈伤组织的诱导 接种材料的灭菌 茎段和叶：蜡质 表面活性剂擦 种子：一般的采用茎段和叶片的方法 根和地下器官 无菌操作 愈伤组织的培养 03 单细胞培养 1单细胞的分离 机械法 酶法 悬浮培养法 愈伤组织在振荡器中培养， 过滤得到单细胞 2单细胞的培养 看护培养：将亲本愈伤组织或高密度的悬浮细胞同低密度细胞一起培养，以促进低密度细胞生长、分裂的培养方法。 铺板培养 微室培养 03 悬浮细胞培养 悬浮细胞培养的建立 细胞系的建立 松散色淡的愈伤组织转入悬浮五代以上 培养 接种量1/5、1/2、1/10 继代培养 生长模式 封闭系统中S型曲线 培养基的选择 培养基的特点 酸碱缓冲能力差 生长素的浓度 条件培养 低密度培养液中放高密度培养悬浮细胞的透析袋 细胞生活力和生长的测定 生活力测定 荧光素二乙酸酯法、伊万兰染色法 细胞生长的测定 细胞计数法、干重、鲜重、堆积细胞体积法 03 大量培养 1高产细胞系的筛选 颜色目视（紫草素） 化学分析（生物碱） 2种子的准备 逐级继代培养 3生物反应器的设计 获得产品生物反应器 得到细胞发酵罐 4培养条件的最适化 混合、通气、剪切力、温度、PH 5培养系统的操作 成批培养、半连续培养、连续培养 6测定方法 电导率测定、kla测定 03 固定细胞培养 细胞固定 在胶体中固定植物细胞 在网或泡沫中固定 空心纤维膜中固定 固定细胞反应器的设计 流动床式 固定床式 03 转化细胞培养 转化 根瘤农杆菌 转化细胞的建立 叶片 悬浮液 不要没过 诱导愈伤组织 转化细胞的培养 农杆菌质粒中携带生长素基因 转化细胞