第六节 蛋白质.pptxVIP

第六章 蛋白质 目录： 6.1、蛋白质的概述 6.2、蛋白质的提取和粗分离 6.3、蛋白质的分离纯化技术 6.4、蛋白质的改性 6.5、蛋白质的应用 一、蛋白质的存在 蛋白质的存在：是一切生物体中普遍存在的一切高分子含氮化合物。通过肽键连接而成的生物大分子，起种类繁多，且各自具有复杂的分子结构和特定的生物学作用。是生物遗传性状表达的主要物质基础。 第一节 蛋白质的概述 二、蛋白质的化学组成 组成元素C、H、O、N、S、P、Fe、I,某些金属元素等。 凯氏定氮法测定蛋白质含量：样品中粗蛋白含量=N%X6.25 式中——6.25即16%的倒数，为1g氮所代表的蛋白质量，g 三、蛋白质的结构和分类 1、结构 （1）单纯蛋白质 清 球 组 精 谷 醇溶 哽（2） 结合蛋白质 核蛋白 糖蛋白 脂蛋白 2、分类 按分子性状分：球形蛋白、纤维状蛋白 按结构分类：单体蛋白、寡聚蛋白、多聚蛋白 按功能分类：活性蛋白、非活性蛋白 四、蛋白质的性质 蛋白质的性质 主要包括胶体性质、两性和等电点、沉淀与变形、颜色反应及其水解 （1）蛋白质的胶体性质 在一般胶体溶液中，分散质点在胶态体系中保持悬浮状态而呈现相当的稳定性，必须具备以下几个条件： 1、质点大小约在1~100nm之间； 2、质点带有相同的电荷； 3、质点与溶剂分子结合，形成溶剂化层。 蛋白质分子表面有很多亲水基团，如氨基、羧基、羟基及—CO—NH—等，在水溶液中能与水分子起水化作用。 因此，蛋白质在水溶液中每个分子表面有一水化层包围着，各个分子之间由水化层互相分隔开来。 同时蛋白质分子具有可离解的极性基团，所以在一定pH值溶液中，蛋白质分子表面带有相同的电荷和它周围电荷相反的离子构成稳定的双电层，所以，蛋白质作为胶态系统是很稳定的 蛋白质溶液同样具有一系列的胶体性质，如不能透过半透膜、吸附能力大、有丁达尔效应、布朗运动等 （2）蛋白质的两性和等电点 蛋白质是由氨基酸组成的大分子物质。所以，与氨基酸类似，蛋白质也是两性物质 （3）蛋白质的变性 蛋白质受到外界物理或化学因素的影响，使空间构象遭到破坏，因而丧失了其生理活性，这一过程和现象称为蛋白质的变性。 使蛋白质变性的物理影视有加热、高压、紫外线照射、X光照等 化学因素哟强酸、强碱、重金属离子、生物碱试剂、有机溶剂等。 大多数蛋白质变性是不可逆的，氮如果空间构象的破话程度不大，也有可能部分或者全部恢复原来的性质 第二节 蛋白质的提取和粗分离 1、材料的选择和处理 首先确定检测方法，选取检测方法的依据包括：酶活性、免疫学活性、物理性质、生物活性、可以利用抗体通过Western blot或dot blot的方法来检测蛋白的表达。 在确定了目的蛋白的特异检测方法之后，在决定蛋白质的取材。 蛋白质的材料来源有4个：动物、植物、微生物和基因工程 2、细胞的破碎与分离 破碎率：被破碎细胞的数量占原始细胞数量的百分比。 Y%=[N0—N]X100 常用的破碎方法：固体剪切法（高速组织分散器、匀浆器） 液体剪切法（超声法、渗透压休克法、高压分散法、反复冻融法） 非机械法（酶解法、表面活性剂处理方法） 索氏提取器 抽提：提取液因蛋白质而异，原则是少量多次，多次提取比一次效果好。 蛋白质的提取 固液分离常用的固液分离方法有离心分离、过滤等。 离心机 蛋白质的沉淀 常用的方法有核酸沉淀剂法，蛋白质沉淀剂法，调节pH值，加热沉淀法，选择性变性、表面变性等方法。 沉淀广泛应用于生物产品下游加工过程的单元操作，能起到浓缩于分离的双重作用。有些蛋白质 的纯化工艺中，沉淀法可能是唯一的分离方法 第三节 蛋白质的分离纯化技术 蛋白质是一种两性电解质，在一定pH值条件下可解离成带电 离子，在电场作用下可向与其本身所带电荷相反的 电极移动，这种现象称为电泳。