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抗生素残留量检验检方法-微生物抑制法
QS-F006
作业指导书
第1页共3页
文件编号：QC-WI017（1） 文件名称：抗生素残留量检验检方法-微生物抑制法 拟制： 审核： 批准： 工具设备/检验器具：
均质机、离心机、平皿、克氏瓶、恒温培养箱、牛津杯、蒸汽杀菌锅、游标卡尺 一、抽样
抽样数量
批次原料鳗数量（Kg） 抽样条数 检体数
1——2000 3 1
2000——5000 6 2
5001——10000 9 3
10001——15000 12 4
15001——25000 15 5
25001—— 21 7
二、测定方法
1.检测原理：用含有敏感菌的琼脂作成平板，上放小管或滤纸片，在管中或纸片上滴加已知抗生素标准液和未知试样液，经培养后，抗生素标准液管或纸片周围琼脂不生长细菌，即为抑菌圈，如试管周围也出现抑菌圈表示含有抗生素。
2、菌种：
ATCC9341藤黄微球菌（检测青霉素、氨基糖苷类）
ATCC6633枯草芽孢杆菌（检测大环内酯类）
ATCC11778蕈状芽孢杆菌（检测四环素族类）。
3.试剂和材料
除另有规定，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
（1）标准液：
a.土霉素(四环素类)：用0.1N盐酸溶解后加入适量的灭菌去离子水配制成100mg/L（ppm）母液,用PH4.5磷酸缓冲液稀释至0.1 mg/L（ppm）。 b.卡那霉素(大环内酯类) :用灭菌去离子水配制成100 mg/L（ppm）母液，用PH8.0磷酸缓冲液稀释至0.1 mg/L（ppm）
c.氨苄西林（氨基糖苷类）：用灭菌去离子水配制成100 mg/L（ppm）母液，用PH8.0磷酸缓冲液稀释至0.1 mg/L（ppm）
（2）缓冲液：
a.柠檬酸、丙酮缓冲液
1/5M柠檬酸溶液和1/2M氢氧化钾溶液等量混合溶液：丙酮：蒸馏=35：35：30比例调制。
1/5M柠檬酸溶液：称取柠檬酸4.2g 用蒸馏水定容至100ml。
1/2M氢氧化钾溶液：称取氢氧化钾2.8g用蒸馏水定容至100ml。
b PH4.5磷酸缓冲液:
称取磷酸二氢钾13.6g用蒸馏水定容至1000ml。
c PH6.0磷酸缓冲液:
称取磷酸二氢钾8.0g及磷酸氢二钾2.0g用蒸馏水定容至1000ml。
d PH8.0磷酸缓冲液:
称取磷酸二氢钾0.523g及磷酸氢二钾16.73g用蒸馏水定容至1000ml。 安全预防措施： 环境控制要求： 参考标准/法规/验收准则：
日本畜水产食品中的残留抗生物质简易检查法
SN/T 1750-2006
残留抗生物质为“阴性” 必要的记录：
预难检验记录表
原料检验记录表
成品检验记录表 人员配备：
1人 1 增加参考标准,修改必要的记录 2007.10.8 0 2003.11.13 修订次 修订内容 生效期
QS-F006
作业指导书
第2页 共3页
文件编号：QC-WI017(1) 文件名称：抗生素残留量检验检方法-微生物抑制法 拟制： 审核： 批准： PH4.5、6.0及8.0磷酸缓冲液要用时才配制，如要保存要在121℃高压杀菌15分钟后密封保存。但如有混浊或有沉淀物时不可使用。
4.试验菌的保存
用普通的细菌斜面培养基30℃培养18小时后确认试验菌在斜面全体上发育后密封冷藏（0-4℃）保存。下代移植每隔一个月至一个半月执行。
三、测定步骤
1.菌悬液的制备
a.ATCC6633枯草芽孢杆菌
将二代保存的菌株接种于普通细菌培养基平板上，30℃培养一星期后形成芽孢。用灭菌生理盐水洗下平板上发育的菌苔，用65℃加热30分钟，再于3000rpm离心20分钟后取掉上清液。让沉淀物在悬浮在灭菌生理盐水中，这就是芽孢原液。
b.ATCC9341藤黄微球菌
将二代保存的菌株接种于增殖用肉汤中，30℃培养18小时的培养液作为试验菌液。
c.ATCC11778蕈状芽孢杆菌
将二代保存的菌株接种于普通细菌培养基平板上，30℃培
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