《蛋白质化学》PPT课件.ppt

蛋白质化学 蛋白质的功能 蛋白质：生命的物质基础 ⑴广泛存在于一切生物体：动植物、微生物 ⑵含量最高的有机物质：约45% ⑶结构和功能多样性 ⑷蛋白质组学 ⑸表达具有差异性：了解人不同发育、生长期和不同生理、病理条件下及不同细胞类型的基因表达，对于研究作用于特定靶分子的药物有重要意义。 蛋白质的结构和功能 蛋白质的结构{ { 第一节 蛋白质的化学组成 1、蛋白质的元素组成：C、H、O、N、S，有些蛋白质含有少量磷或金属元素铁、铜、锌、锰、钴、钼，个别蛋白质还含有碘 。 2：蛋白质含量的测定：凯氏定氮法(测定氮的经典方法) 氮含量约为16% 100克样品中蛋白质的含量 ( g % )= 每克样品含氮克数× 6.25×100 优点：对原料无选择性，仪器简单,方法也简单； 缺点：易将无机氮(如核酸中的氮)都归入蛋白质中,不精确。 二、蛋白质的基本组成单位——氨基酸 生物界存在20种蛋白质氨基酸和200多种非蛋白质氨基酸 氨基酸的通用性为在不同的生物体内表达同一种蛋白质，供医学和药学所用，提供理论基础。 所有的蛋白质AA，除脯氨酸和甘氨酸外，均为L-α-氨基酸，这是蛋白质最大的共同点。归纳AA的通性，才能了解蛋白质的性质。 思考题：如何得知蛋白质由AA组成？ 1.氨基酸的结构 二、基本氨基酸的分类 二.氨基酸的理化性质 1.一般物理性质 常见氨基酸均为无色结晶,其形状因构型而异 酪氨酸 ?max＝275nm 苯丙氨酸 ?max＝257nm 色氨酸 ?max＝280nm 思考体：一般蛋白质 的吸光度在多少nm检测？ 氨基酸在水溶液中，离解成两性离子。在两性离子中，氨基是以质子化(-NH3+)形式存在，羧基是以离解状态(-COO-)存在。 在不同的pH条件下，两性离子的状态会发生变化，因此，AA对酸和碱比较敏感。 几种生物活性肽 1. 谷胱甘肽( GSH ) 蛋 白 质 的 分 子 结 构 蛋白质结构的主要层次 蛋白质分子的构象示意图 蛋白质结构的多样性： ?-折叠 不规则卷曲 是用来阐述没有确定规律性的那部分肽链结构。 相对没有规律性的排布，但是其同样表现重要生物学功用。 二级结构的维系力:氢键 .蛋白质的四级结构 血红蛋白 2. 蛋白质一级结构测定的意义 ①是推测蛋白质高级结构的分子依据 ②是理解蛋白质生理功能的分子基础 ③是阐明遗传疾病发生机理的分子手段 ④是研究生物进化的分子佐证 不同生物与人的Cytc的AA差异数目 协同效应：蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响另一个亚基与配体结合能力的现象。 蛋白质等电点 蛋白质 等电点 Pepsin 1.0 Urease 5.0 Hemoglobin 6.8 ●Chymotrypsinogen 9.5 Lysozyme 11.0 变性蛋白质的特点: 粘度增加，溶解度降低，易沉淀，易被蛋白酶降解，丧失生物学活性。 第四节 蛋白质的分离纯化 一、根据蛋白质溶解度不同的分离方法 二、根据蛋白质分子大小差别的分离方法 三、根据蛋白质亲电性质进行分离 四、根据蛋白质亲和性质进行分离 .透析 离心机结构示意图 凝胶过滤 四、亲和层析法 利用蛋白质对配体的特异性不同，从而对蛋白质混合液体进行分离。 二.蛋白质的胶体性质 蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自1万至100万之巨，其分子的直径可达1～100nm，为胶粒范围之内。 * 蛋白质胶体稳定的因素： 颗粒表面电荷 水化膜 + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 水化膜 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒 酸 碱 酸 碱 酸 碱 脱水作用 脱水作用 脱水作用 溶液中蛋白质的聚合沉淀 * 蛋白质的沉淀 在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。 中性盐沉淀（比如硫酸铵） ◎有机溶剂沉淀：乙醇法沉淀蛋白质 ◎生物碱试剂：药检（三氯醋酸） 蛋白质胶体分子大小不能通过半透膜，可以用透析法来分离纯化。 ◎ 三.蛋白质的变性 * 蛋白质的变性：在某些理化因素作用下，蛋白质特定的空间构象被破坏，也即有序的空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质改变、生物活性的丧失。 若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可