Bbe藻类野外现场分析仪Fluoroprobe.DOC

Bbe荧光法藻类检测原理 Bbe是全球著名的藻类分类检测设备供应商，该公司生产一系列藻类分类检测设备：包括在线仪器、实验室用仪器、野外用仪器。所有这些仪器采用同样的技术，只是设备的外观构造和功能组合不同。这里系统介绍通用的检测原理，然后，分别介绍不同设备的功能组合。 一、藻类的荧光反应特性 荧光法测藻就是利用藻类的荧光特性进行分类定量分析。所以先介绍藻类的荧光特性和bbe采用的激励光。藻类在受到外来光刺激时，将刺激光的能量转化为光合作用能量、荧光和发热，其中荧光很容易检测到的。所谓荧光，就是无论外激励光的波长是多少，藻吸收后将其转化成一特定波长的光（685纳米）。 研究发现两个特性：一是同一种藻受到不同波长单位强度激励光激励时，发出的荧光强度不同；二是不同的藻在受到相同波长单位强度激励光激励时，发出的荧光强度也不同。Bbe选择了325纳米、450纳米、525纳米、570纳米、590纳米和610纳米六种不同波长的激励光对被测对象进行刺激。其中325纳米是用来补偿黄色物质（有机物）的，另外几个波长就是为了定量分析不同藻类的。 Bbe所采用的激励光：强度都是1，波长不同。 不同的藻类其叶绿素-a的荧光特性不同，如果我们准备单位浓度的蓝藻叶绿素-a，用以上不同的激励光激励，得到一组数据，这组数据就是蓝藻叶绿素的特征；换成单位浓度的绿藻叶绿素-a，同样用这组光激励，得到绿藻的特征值。实验证明，每种藻的叶绿素-a有其特有的荧光特性。这些荧光特性，可以用来定量分析不同的藻产生的叶绿素-a的浓度。 不同类的藻产生的单位浓度的叶绿素-a的荧光特征曲线 二、分类检测叶绿素-a的浓度 根据以上藻的荧光特性，可以检测出不同类的藻贡献的叶绿素-a的浓度。一个水样中的叶绿素-a有多少是蓝藻贡献的、多少是绿藻贡献的、多少是硅甲藻贡献的、多少是隐藻贡献的。检测到不同的藻类贡献的叶绿素-a的浓度，就可以估计藻的浓度。 分类检测叶绿素-a的浓度还基于以下事实：一是在激励光一定的情况下，任何一种藻产生的荧光强度与其所含的叶绿素-a的浓度成正比；二是在激励光一定的情况下，几种不同的藻混合体产生的荧光强度等于这几种同样浓度叶绿素-a的样品产生的荧光强度的总和。如果用m表示藻的种类，n表示激励光的编号，Fmn表示在n激励光作用下m类藻贡献的叶绿素产生的荧光强度，Fn表示在激励光n的作用下所有叶绿素-a产生的总荧光强度，Cm表示m类藻贡献的叶绿素-a的浓度，则： Fmn = Km,n X Cm （1） 其中 Km,n 是只依赖于m和n的常数，当藻的种类和激励光确定后，该值不变。 Fn = Km1,n X Cm1 + Km2,n X Cm2 + Km3,n X Cm3 + ...+ Kmt,n X Cmt (2) 有了以上原理，我们事先可以通过实验研究，确定所有的Km,n值，也就是（2）中的所有K值是可以事先取得，并存储于检测设备内部的。 对于一个被测样本，Fn是可以通过设备上自带的光度计直接检测到的，Cm1, Cm2, ... Cmt是我们需要检测的浓度。显然，对于一个激励光，用（2）式可以得到一个线性方程，我们有5个激励光，就可以得到5个线性方程组成线性方程组，可以解出5种浓度。 研究还发现，藻类按照其荧光特性，恰可以分为4大类。如果细分还可以分成更多的小类，但该仪器最多只支持到8类。 这个方法首先检测的是不同的藻贡献的叶绿素的浓度。 三、分类检测藻的浓度 分类检测到不同藻贡献的叶绿素浓度后，再根据历史上大量的经验数据，确定平均每个蓝藻贡献多少叶绿素-a，每个绿藻平均贡献多少叶绿素-a，等等。有了这些数据，就可以估算被测样本中不同藻的浓度。 四、藻的活性检测 同样采用荧光法可以检测到藻的活性，检测原理如下： 在暗室环境下，当很弱的激励光照到藻上时，藻类将能量分解为三部分，一部分用来进行光合作用，一部分转化为荧光，一部分产生热量。显然，如果藻的活性强，光合作用消耗的能量就越多，产生的荧光的强度就越小；反之，如果藻的活性弱，光合作用就比较弱，消耗能量少，用来产生荧光的能量就大，荧光强度就强。所以可以通过荧光强度判断藻的活性。具体实现如下： 实验一是先在暗室环境下，用很弱的激励光照到藻上，检测到荧光强度F0。这个值是在该弱激励光照射下，细胞进行光合作用时，同时产生的荧光强度。 第二个实验是，在暗室环境下，用很强的激励光照到藻上，这时藻的光合作用达到饱和状态。也就是即使再增加光强，光合作用也不会增强。此时检测到荧光强度F1，再将实验一用的弱激励光，照射到藻上，弱激励光的能量不会用来进行光合作用，但是荧光强度变成F2