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出口肉中甲砜霉素残留量检验方法 　　中华人民共和国进出口商品检验行业标准 　　SN0199-93 　　Methodfordeterminationofthiamphenicolresiduesinmeatforexport 　　1主题内容与适用范围本标准规定了出口肉中甲砜霉素残留量检验的抽样、制样和气相色谱测定方法。本标准适用于出口鸡肉中甲砜霉素残留量的检验。 　　2抽样和制样 　　检验批以不超过2500件商品为一检验批。同一检验批内商品应具有同一特征,如包装、标记、产地、规格、等级等。 　　抽样数量 　　　检验批中的件数　　最低抽样件数 　　1～25　　1 　　26～100　　5 　　101～250　　　10 　　251～500　　　15 　　501～1000　　　17 　　　1001～2500　　20 　　抽样方法按规定的柚样件数随机抽取,逐件开启。每件至少取一包,去掉塑料薄膜,从每包抽取肉样不少于50g,总量不少于2kg,放入清洁容器内,加封后,标明标记,及时送交实验室。 　　样品的制备将所取原始样品缩分出1kg,取可食部分,经组织捣碎机捣碎,均分成两份,装入洁净容器内,密封,作为试样,并标明标记。 　　试样保存将试样于-18以下冷冻保存。注:在抽样和制样的操作过程中,必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 　　3测定方法 　　方法提要将鸡肉样用丙酮提取,加入氯化钠溶液,用乙酸乙酯提取,蒸除乙酸乙酯后,加入乙腈及正己烷,振摇均匀,分取乙腈层,真空除去乙腈后,用乙酸乙酯、乙酸酐、吡啶进行乙酰化,用硅胶柱净化后用配有火焰光度检测器的气相色谱仪测定,外标法定量。 　　试剂和材料 　　丙酮:分析纯,重蒸馏。 　　正己烷:分析纯,重蒸馏。 　　乙酸乙酯:分析纯,重蒸馏。 　　乙腈:分析纯,重蒸馏。 　　甲醇:紫外光谱纯。 　　三氯甲烷:分析纯,重蒸馏。 　　乙酸酐:优级纯。 　　吡啶:优级纯。 　　氯化钠:优级纯。 　　无水硫酸钠:分析纯,于650灼烧4h,冷却后贮于密闭容器中。 　　甲砜霉素标准品:纯度≥99%。 　　甲砜霉素标准溶液:精确称取甲砜霉素标准品溶于丙酮,定容至50mL。取此液5mL用丙酮稀释至50mL,为标准工作溶液。此液1mL含甲砜霉素20μg。 　　仪器和设备 　　离心管:50mL。 　　高速均质器。 　　旋转蒸发器。 　　离心机。 　　硅胶柱:将柱色谱用硅胶(100～200目)3g用三氯甲烷装入10mm×300mm玻璃层析柱中,上面装入无水硫酸钠1g。 　　气相色谱仪:配FPD检测器,S型滤光片(329nm)。 　　测定步骤 　　提取称取试样20g(精确到)于50mL离心管中,加入30mL丙酮,均质1min后,以3000～3500r/min离心5min,将上清液倒入另一个50mL离心管中,残留物中加入20mL丙酮,同样均质离心后合并上清液。残留物中再加入10mL丙酮,同样均质离心后,合并上清液。 　　净化将离心管内的丙酮提取液再离心5min,将上清液移入分液漏斗,加入3%氯化钠150mL,混匀,再加入150mL乙酸乙酯振摇混匀,静置分层后将乙酸乙酯层转移到500mL烧瓶中;水层溶液再用100mL、50mL乙酸乙酯按上述步骤萃取两次,合并乙酸乙酯萃取液,用旋转蒸发器蒸除其中的溶剂,残留物用5mL、3mL及2mL乙腈分三次洗入分液漏斗,加入正己烷30mL,振摇,静置,分层后弃去正己烷,用旋转蒸发器蒸干乙腈层。 　　乙酰化在残留物中加入乙酸乙酯、乙酸酐及吡啶2滴,混匀后,放置30min。在反应液中加入水5mL,混匀。用三氯甲烷提取3次,每次用5mL,收集三氯甲烷提取液。用水洗涤三次,每次用5mL水,弃去水层后,在三氯甲烷中加入无水硫酸钠5g摇匀。静置后将溶液注入硅胶柱。用三氯甲烷30mL洗剩下的硫酸钠,将洗液注入硅胶柱,弃去淋洗液。用甲醇-三氯甲烷(2+8)50mL洗脱,收集洗脱液,用旋转蒸发器蒸发至干,以丙酮mL溶解残留物,供气相色谱测定。 　　测定 　　色谱条件 　　a.色谱柱:玻璃柱,1m×3mm(内径),填充物为2%(m/m)OV-17涂于ChromosorbWHP(80～100目)； 　　b.色谱柱温度:280; 　　C.进样口温度:300; 　　d.检测器温度:300; 　　e.氮气:纯度≥%,60mL/min; 　　f.氢气:75mL/min; 　　g.空气:100mL/min。 　　色谱测定根据样液中甲砜霉素含量情况,选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中甲砜霉素响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定,在上述色谱条件下,甲砜霉素保留时间约为。 　　空白试验除不加试样外,按上述测定步骤进行。 　　结果计算和表述用色谱数据处理机或按下列公式计算: 　　　h·