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RNAi综述及其在植物中的应用与展望摘要：RNAi现象是是由双链RNA介导的转录后沉默现象，双链RNA在Dicer酶作用下被切割形成siRNA，随后载入RISC，与目标mRNA配对导致mRNA的切割产生基因沉默现象。而miRNA的效应与siRNA产生的RNAi现象有着大量共同之处，如同样被Dicer酶切割，均通过形成RISC发挥基因沉默效应。有一些实验表明，RNAi与基因组修饰有着密不可分的联系，这些修饰揭示了双链RNA有着许多未知功能的可能性。同时，应用RNAi现象对植物进行基因工程改造，在植物的功能基因组研究和植物性状改善中显示了极大的潜力。2006年10月2日上午11时30分(北京时间17时30分)，瑞典皇家科学院诺贝尔奖委员会宣布，将2006年度诺贝尔生理学或医学奖授予两名美国科学安德鲁·法尔和克雷格·梅洛，以表彰他们发现了RNA干扰现象。RNA 干扰是指外源或内源性的双链RNA进入细胞后引起与其同源的RNA 特异性降解, 从而抑制相应基因表达, 表现出特定基因缺失的现象,它与植物中的共抑制或转录后基因沉默真菌中的基因阻抑一样, 均是生物体内普遍存在的一种生理机制[1]。RNAi是一种动植物乃至真菌中均普遍存在的现象，目前在治疗人类疾病，改善作物性状等方面显示着极大的发展潜力。一、RNAi的发现1990年，Napoli等报道了牵牛花中查尔酮合成酶基因（CHS）中被其称之为共抑制的现象，当他们将CHS基因转入牵牛花中使其过量存在后，其表达量不升反降，部分花的花色由深色变为白色。他们认为这种现象与甲基化相关[2]。次年，ANDREW FIRE等报道了向线虫体内注射RNA使得基因沉默的现象[3]。他们发现注射进的RNA被加工为了反义RNA，并提出了RNA interference这一概念。1993年，Nicoletta Romano报道了Neurospora crassa中，外源基因的导入对原有相同基因的抑制作用。1995 年, Guo 和Kemphues报道，在研究线虫胚胎发育的极性时利用反义RNA成功阻断线虫par-1 基因的表达[4]。1998年，ANDREW FIRE等报道，对于RNAi现象，双链RNA的效果比单链RNA好得多[5]。而且这一效应十分强大，极其微量的RNA即可诱导RNAi现象，甚至在被注射RNA的线虫的后代中，这一现象仍可持续。这一系列的研究奠定了RNAi研究的基础，为RNAi机制及其应用的开展做出了不可磨灭的贡献。二、RNAi的机制1. RNAi的特点①高效性：极少量的miRNA即可以引起基因表达的抑制，而极低剂量的siRNA除了可以引起直接的抑制外，还可以通过诱导更多的siRNA生成引起强烈的连锁反应。②特异性： siRNA与靶标RNA严格互补配对。miRNA对于序列的要求不如siRNA严格，可以允许与互补碱基有几个核苷酸的差异，故一种miRNA可以作用于多种mRNA，反过来一种mRNA也可以被多种miRNA作用。③可传播性与遗传性：在线虫中，注入的反义RNA可以扩散到邻近组织中发挥RNAi作用，也可以被有效转运到全身各处发挥作用。而在子一代中，这种效应依然有较强的存在。④ATP依赖性：去除内源性ATP 后, dsRNA对目的基因的抑制作用明显降低或消失,而加入外源性ATP后,仍不能加强其抑制作用,显示RNAi是一个ATP依赖的过程。Zamore等认为,RNAi中至少有两个过程需要ATP供能: 一是dsRNA被Dicer酶酶切产生siRNA;二是siRNA与RISC 结合解链后形成有活性的RNA诱导沉默复合物( RNA induced silencing complex ,RISC)。[1]2. RNAi过程中几个重要因子① Dicer酶Dicer 首先在动物中发现, 在植物中称为Dicer-like protein(DCL)。图1展示的是人类中的Dicer酶。Figure 1人类Dicer酶示意图如图，Dicer酶主要存在六个结构域，N端的RNA解旋酶结构域（需要ATP），DUF 283结构域，PAZ结构域，C末端的两个具有RNase III的结构域和双链RNA结合位点[6]。RNA 解旋酶结构域序列在Dicer 家族成员中高度保守, 由350~400 个氨基酸残基构成。PAZ结构域通过一条α螺旋与RNaseIII相连，并被蛋白N端所缠绕。N末端包括反平行β折叠和三条α螺旋。位于Dicer C 端的2个RNaseIII结构域和1个dsRBD。通过RNase III结构域能将dsRNA切割成20~25nt的siRNA，这种siRNA3‘末端突出两个核苷酸，是RNase III产物的典型特征。。有些Dicer酶除了RNase III结构域外，可以仅保留其他结构域的一种至几种，显示出了Dicer酶的一