非无菌产品微生物检查控制菌检查法讲解课件.ppt

 耐胆盐革兰阴性菌检查 定量试验 1、取定量供试品的预培养物或其稀释液分别接种至肠道菌 增菌肉汤中。 30～35℃，培养24～48小时。 2、上述每一培养物分别划线接种于紫红胆盐葡萄 糖琼脂平板上。 30～35℃，培养18～24小时。 若紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上有菌落生长，则对应培养管为阳性，否则为阴 性。根据各培养管检查结果，从表2查对1g或1ml供试品中含有耐胆盐革兰阴 性菌的最大可能数。  表2 耐胆盐革兰阴性菌的可能菌数 各供试品量的检查结果 每1g（或1ml）供试品中 可能的菌数（N） 0.1g/ml 0.01g/ml 0.001g/ml ＋ ＋ ＋ N＞103 ＋ ＋ － 102＜N＜103 ＋ － － 10＜N＜102 － － － N＜10  供试品检查—大肠埃希菌 大肠埃希菌是肠杆菌科埃希菌属的代表种。 大肠埃希菌是两端钝圆的短小直杆菌，（1.1～1.5）m×(2.0～ 6.0)μm单个或成 对，革兰阴性无芽孢，多有鞭毛培养最适温度为37℃可在15-46℃生长，兼性厌氧。  修订前 取1:10供试液至胆盐乳糖增菌（大肠、金葡）18-24h MUG培养基（大肠）5h、24h MaC琼脂（大肠 、指示） 18-24h 修订后 取1:10供试液至TSB（大肠、 金葡、）18-24h MaC肉汤 （大肠、 金葡）42-44 ℃ 24-48h MaC 琼脂 （大肠 ）18-72h  方法适用性试验  大肠埃希菌检查 检验程序 取供试品，照附录“微生物计数法”制成1：10供试液。 取相当于1g或1mL供试品的供试液，接种至适宜体积 的胰酪大豆胨肉汤中。 30～35℃培养18～24小时。 取上述预培养物1mL接种至100mL麦康凯肉汤中。 42～44℃培养24～48小时。 取麦康凯肉汤培养物划线接种于麦康凯琼脂平 板上。30～35℃培养18～72小时。结果判断 -若麦康凯琼脂平板上有菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试 验, 确证是否为大肠埃希菌； -若麦康凯琼脂平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结 果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。  供试品检查—— 沙门菌 沙门菌为革兰阴性杆菌，无芽孢，菌体 通常（0.4～0.9）μm×(1～3) μm，两 端钝圆。需氧或兼性厌氧，10～42℃皆可 生长，最适温度37℃。  检验程序 修订前 营养肉汤供试液（18-24h ) TTB (沙门、金葡） 18-24h SS / MaC 琼脂（沙门、金-）18-48h RV 氯化镁孔雀绿沙门菌增菌肉汤 XLD 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂 SS： 沙门、志贺菌属琼脂 XLD 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂 修订后 TSB 供试液（ 18-24h ） RV肉汤（沙门、金葡）18-24h XLD琼脂（沙门、 指示）18-48h  沙门菌检查  沙门菌检查 沙门菌在木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂平板上生长良好，菌落为 红色、中心有或无黑色。 鉴定试验 挑选疑似菌落穿刺接种于三糖铁琼脂培养基高层 斜面上培养 18～24小时，或采用其它适宜方法进一步鉴定。 结果判断 若木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂平板上有疑似菌落生长， 三糖铁琼脂培养基 斜面为红色、底层为黄色 或斜面黄色、底层有黑色 应进一步进行适宜的鉴定试验, 确证是否为