乳糖操纵元与色氨酸操纵元.pptVIP

乳糖操纵元(lac operon) 内容提要： 乳糖操纵元的结构 酶的诱导——lac体系受调控的证据 乳糖操纵元调控模型 影响因子 一、乳糖操纵元的结构 i基因 P O lacZ lacY lacA 乳糖操纵元的结构 图 Lac操纵元及各组分详图 乳糖操纵元的结构 1) 结构基因： 分解乳糖的三种酶，使乳糖分解，产生能量。 2) 操纵基因 3)?启动子 4)??CAP 5)??i基因：上游，产生阻遏物。 结构基因 一些化学合成的乳糖类似物，不受β-半乳糖苷酶的催化分解，却也能与R特异性结合，使R构象变化，诱导lac操纵元的开放。例如异丙基硫代半乳糖苷(isopropylthiogalactoside,?IPTG)就是很强的诱导剂，不被细胞代谢而十分稳定。 X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷)也是一种人工化学合成的半乳糖苷，可被β-半乳糖苷酶水解产生兰色化合物，因此可以用作β-半乳糖苷酶活性的指示剂。IPTG和X-gal（分子式见图）都被广泛应用在分子生物学和基因工程的工作中。 义务诱导物 (gratuitous inducer)： 如果某种物质能够促使细菌产生酶而本身又不被分解，这种物质被称为义务诱导物，如IPTG（异丙基- β –D-硫代半乳糖苷）。 二、酶的诱导—lac体系受调控的证据 三、乳糖操纵元调控模型 乳糖操纵元的双调控系统： (1)受乳糖与阻遏蛋白调控的、可诱导的负调控系统; (2)受cAMP与CAP调节的、可诱导的正调控系统。葡萄糖通过调节cAMP的合成间接监控这一过程。 以此保证大肠杆菌灵活、经济、有效地适应外界环境，只有在必需的时候（只有乳糖，没有葡萄糖）才启动乳糖操纵子的表达。 （一）阻遏蛋白的负性调节： （分解代谢）——可诱导调控 （二）CAP的正性调节 （三）协调调节 （一）阻遏蛋白的负性调节 （分解代谢）——可诱导调控 1、乳糖操纵元调控模型主要内容 2、阻遏蛋白的负性调节： （分解代谢）——负控诱导 1、乳糖操纵元调控模型主要内容 ① Z、Y、A基因的产物由同一条多顺反子的mRNA分子所编码。 ② 该mNA分子的 启动区（P）位于阻遏基因（I）与操纵区（O）之间，不能单独起始半乳糖苷酶和透过酶基因的高效表达； ③ 操纵子(operater)是DNA上的一小段序列（仅为26bp），是阻遏物的结合位点。 ④当阻遏物与操纵基因结合时，lac mRNA的转录起始受到抑制。 乳糖操纵元调控模型主要内容： ⑤诱导物通过与阻遏物结合，改变它的三维构象，使之不能与操纵基因结合，从而激发lac mRNA的合成。当有诱导物存在时，操纵基因区没有被阻遏物占据，所以启动子能够顺利起始mRNA的合成。 Repressor and RNA polymase bind at site that overlap aroud the startpoint of the lac operon 操纵位点的回文序列 图 当无诱导物时阻遏物结合在操纵基因上 图 诱导物和阻遏物成为调节操纵元的开关 2、阻遏蛋白的负性调节： （分解代谢）——负控诱导 1) 无乳糖存在时，阻遏物可以结合在操纵基因上—→阻止转录过程—→基因关闭 2)?有乳糖存在时，乳糖与阻遏物结合—→阻遏物变构—→阻遏物不能结合操纵基因—→转录进行—→基因开放 可诱导调控的操纵元，其基因表达产物都是利用某种营养物的酶体系（分解代谢） ??? 有营养物 ——相应基因开放 ??? 无营养物 ——细胞就没必要产生相应的酶 （二）CAP的正性调节 1．调控机理： CAP：Catabolite activator protein，分解代谢活化剂蛋白，由活化剂基因(A)编码。也叫环腺苷酸受体蛋白(cAMP?receptor?protein, CRP)。 cAMP：Cyclic AMP ATP在腺苷酸环化酶的作用下转变成环腺苷酸 (cyclic adenosine monophosphate, cAMP)。 CAP有2种状态： 无活性态：CAP未与cAMP结合时是没有活性的，不能与特定的DNA序列结合。 活性态： CAP与cAMP结合后，发生空间构象的变化而活化，能以二聚体的方式与特定的DNA序列结合，从而增强RNA聚合酶的转录活性，可使转录提高50倍。 在lac操纵元的启动子Plac上游端有一段与Plac部分重叠的序列，能与CAP特异结合，称为CAP结合位点(CAP?binding?site)。 （二）CAP的正性调节 当葡萄糖浓度高时，cAMP浓度降低，CAP不能被活化，lac操纵元的结构基因表达下降（如下图）。 当