第17章-高效液相色谱法.pptVIP

五、 数据处理系统 色谱工作站记录和处理色谱分析数据 工作站的功能主要包括： 自动诊断功能、智能控制功能、数据实时采集和图谱处理功能、进行计量认证功能和多台仪器控制功能等 第五节 高效液相色谱法的应用 一、 定性定量分析 二、 制备纯物质 三、 分离 一、 定性定量分析 定性分析方法： 如标准对照法，保留值定性法、相对保留值定性法和文献值对照法等。也可收集分离馏分，用专属的化学反应或红外、荧光、质谱等非色谱法定性 定量分析方法： 外标法、内标法（同GC） 二、 制备纯物质 方法是：在色谱仪的出口处，安装一个馏分收集器，按色谱峰的出峰信号起落，逐一收集起来，除去流动相，即可得到物质的纯品，纯度可达99.99%以上。 三、 分离 成果： 高效液相色谱法不仅分离了大量的无机物(如稀土及各种裂变产物等)，同时还对大量的合成有机物、天然产物、核酸、核甙、核甙酸及有关的化合物进行了有效的分离，解决了许多生物学上的重要问题(如蛋白质的结构和氨基酸的快速分离等)。 优点： 它不受样品挥发度和热稳定性的限制，非常适合于分离生物药品的大分子、离子型化合物、不稳定的天然产物以及其它高分子量和挥发性差的混合物。 目标测试 1. 何为化学键合固定相？有何优点？ 2. 什么是梯度洗脱？有何优点？ 3.高效液相色谱法流动相怎么处理？ * 第三节 高效液相色谱法的主要类型 分配色谱法(partition hromatography) 吸附色谱法(adsorption chromatography) 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC） 化学键合相色谱法(bonded phase chromatography. BPC) 胶束色谱法(micellar chromatography；MC) 根据固定相和流动相相对极性的大小，液液分配色谱法又可以分为 正相液液分配色谱法(normal-phase liquid- liquid partitionn chromatography, NLLC)和反相液液分配色谱法(reversed-phase liquid- liquid partition chromatography ,RLLC) 而后者又可进一步分为 普通反相液液分配色谱法 离子对色谱法(ion pair chromatography ,LPC) 离子抑制色谱法(ion suppression chromatography ,ISC) 一、 液-固吸附色谱法 1. 液-固吸附色谱法的固定相 常用的有硅胶、氧化铝及高分子多孔微球(有机胶)，其次还有分子筛及聚酰胺等 硅胶 表孔硅胶、全多孔硅胶、堆积硅珠 全多孔硅胶 优点：表面积大，容量大 缺点：孔径深，传质阻力大 无定形全多孔硅胶(YWG)：粒径5～10um，理论塔板数每米2～5万，价格便宜、载样量大，但渗透性差 球形全多孔硅胶(YWG)：粒径3～10um，理论塔板数每米8万，涡流扩散项小，渗透性好。 一、 液-固吸附色谱法 1. 液-固吸附色谱法的固定相 堆积硅珠(YQG) 由二氧化硅溶胶加凝结剂聚合而成。粒径3～5um，理论塔板数每米8万，传质阻力小，柱容量大，是一种好的高效填料 高分子多孔微球(YSG) 又称有机胶，表面为芳烃官能团，由苯乙烯与二乙烯苯交联而成 用于分离芳烃、杂环、甾体、生物碱、脂溶性维生素、酚、醛、醚等。柱效低，但选择性好，峰形好。 2.液-固吸附色谱法的流动相 常用溶剂: 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。 流动相的选择 应重点考虑溶剂的极性 溶剂的极性强弱可用Snyder提出的溶剂极性参数ε0来表示。ε0为溶剂分子在单位吸附剂表面的吸附自由能。ε0越大，说明溶剂的极性越强，洗脱能力就越强。 流动相类型 分类 流动相按组成不同可分为单组分和多组分； 按极性可分为极性、弱极性、非极性； 按使用方式有固定组成淋洗和梯度淋洗。 在液-固吸附色谱法中，常常采用二元或二元以上的混合溶剂系统 这样可以找到适合强度的溶剂系统，而且还可以保持溶剂的粘度以降低柱压和提高柱效，还可以提高分离的选择性 选择流动相时应注意的几个问题： （1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。 二、 化学键合相色谱法 以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合相色谱法(bonded phase chromatography；BPC)