基因组学第10章PPT课件.ppt

常规胚胎干细胞的获取及培养 诱导哺乳动物体细胞转变为胚胎干细胞 1) 根据核移植可以判断卵细胞中含有促使体细胞基因组重新程序化的因子. 2) 胚胎干细胞可以持续维持多能分化的潜力, 表明有控制胚胎干细胞属性(identity)的遗传因素. 3) 分离与鉴定与胚胎干细胞生成与维持的基因是逆转体细胞程序化的前提. 寻找决定胚胎干细胞命运的基因 1) Yamanaka等选择24个在胚胎干细胞和肿瘤细胞中表达上调的基因作为胚胎干细胞决定候选基因. 2) 将上述基因构建到逆转录病毒表达载体中,它们处于Fbx15基因的调控顺序下游, 并将它们转化老鼠胚胎成纤维细胞(MEF). 3) Fbx15基因是胚胎干细胞专一性表达的. 4) 实验结果证实单个外源基因的导入不能获得胚胎成纤维细胞的逆转, 但组合的转化可产生具有胚胎干细胞形态特征的细胞, 这些细胞被称为iPS(induced pluripotent stem)细胞. 见: Cell 126:663-676, 2006 增强子作用的DNA环化模型与绝缘子的关系 高等生物基因组普遍存在甲基化 1) DNA分子的化学修饰主要是甲基化，脊椎动物基因组中约60-80%双核苷酸CpG的胞嘧啶(C)被甲基化。被子植物基因组中，甲基化位置主要出现在CpG和CpNpG回文对称顺序，大约20-30%的胞嘧啶(C)被甲基化。DNA的甲基化在基因的表达调控中起重要作用。 2） 基因组的甲基化模式可影响表型并能通过体细胞遗传，但不该变细胞的基因型. 基因组的甲基化是表观遗传的重要内容之一. 3) 基因组DNA甲基化是基因表达调控的重要方式, 并与染色体重建(chromatin remodeling)有关. DNA去甲基化与肌肉细胞分化 基因组DNA甲基化的生物学 1）细胞命运的确定与基因组DNA的甲基 化状态有关； 2）DNA甲基化是决定基因表达模式的重 要因素； 3）DNA甲基化模式可以在上下代细胞之 间传递； 4）DNA甲基化只限于碱基的修饰，并不 改变DNA的顺序组成。 染色质重建 1)染色质重建(chromatin remodeling)系指染色体结构状态的改变.染色质重建可以是可逆的,也可以是不可逆的. 2)染色质重建涉及DNA的甲基化, 组蛋白的乙酰基化和去乙酰基化. 3)染色质重建的目的是使染色质的物理状态处于松弛或收缩, 其结果使转录活化因子可接触或不能接触调控顺序. DNA甲基化与染色质重建 siRNA可诱导异染色质形成 见:Current Opinion in Cell Biology 16:230-238, 2004 siRNA介导的染色质沉默 DNA甲基化与转座子活性 染色质结构的不可逆变化与基因沉默 在个体发育与细胞分化过程中，当某些基因已经完成预 定的表达程序后必需永久性关闭。这一任务可以通过 DNA甲基化促使染色质的重建完成。Polycome:多结蛋白. DNA甲基化抑制转座 等位基因成员的非对称表达 1) 二倍体基因组中每个等位基因均有两个等位基因成员. 2)二倍体每个等位基因成员的表达模式有三种: 母源基因表达, 父源基因表达, 两个成员均表达 3) 有三种机制决定等位基因成员的非对称表达: 1.X-染色体失活; 2.基因组印记; 3.随机选择. 基因组印记 1)1991年TM.德切艾拉等报道, 老鼠7号染色体上中有一个 称为类胰岛素生长因子Igf2的基因(insulin-like growth factorII),该基因的突变纯合子表现为侏儒症.在杂合子 中,如果突变等位基因来自父亲, 表型异常.如果来自母 亲,表型正常,即母源Igf2基因在子代被抑制. 2) 这种因为亲本来源不同而使等位基因表达模式发生改 变的现象称为印记(imprinting).它有两个特点: 1.子代的两个等位基因中有一个发生沉默, 即不表达. 2.哪一个等位基因沉默取决于等位基因的亲本来源. 这是在哺乳动物中最早发现的表观遗传现像. 随后又在老 鼠中发现另外一个基因, 即7号染色体上与Igf2紧密连锁 的H19也有类似的情况, 只是表现相反, 即父源的H19等位 基因在子代中不表达, 母源的H19基因在子代中正常表达. 基因组印记的分子机制 绵羊肥臀突变的遗传符合典型的基因组印记模式 In 1996, a team led by Cockett and Georges explained what was going on: Only lambs that inherit the callipyge mutation from their father