第四篇 酶工程.pptVIP

第四章 酶工程 一、概述 问题：1、什么是酶？酶作为催化剂有何特点？ 2、什么是酶工程？发展历程如何？ 3、酶工程研究的内容是什么？ 酶 ：是具有催化活性的生物物质。 作为催化剂，酶具有催化剂的共性： 1）、只需要很少量就可以催化大量物质反应，在反应前后其质量不变； 2）、它只能加速可逆反应达到平衡的时间，而不能改变反应的平衡点； 3）、只能催化热力学允许发生的反应。 作为生物催化剂，酶具有自己的特性： 1）、催化效率高； 2）、专一性强； 3）、反应条件温和； 4）、活力可被调控； 5）、对环境条件比较敏感。 酶工程：利用酶的特异性催化功能或微生物细胞、动植物细胞、细胞器的特定功能，并通过工程化为人类生产有用的产品及提供有益服务的技术。 酶 工程发展所经历的历程： 1）、自然酶的开发应用； 2）、固定化酶和固定化细胞； 3）、多酶 反应器； 4）、仿生技术。 酶工程的技术内容： 1）、各类自然酶的开发和生产； 2）、酶的分离、纯化及鉴定技术； 3）、固定化技术； 4）、多酶 反应器的研制和应用； 5）、与其它生物工程技术领域的交叉和渗透； 6）、酶分子的改造与修饰； 7）、酶的模仿技术； 8）、酶 的动力学研究。 其中，固定化技术是酶工程的核心技术。为什么这么说呢？ 因为只有固定化技术的发展和应用，酶在工业生产中的应用价值才得以真正体现。 二、酶的开发与生产 1、目的酶生产菌株的获得： 1）、从自然界分离筛选； 2）、人工诱变育种； 3）、遗传工程育种。 2、酶的生产方式： 通过各种方法得到优良的菌株，是酶生产的先决条件。要想有效地进行酶生产，还必须探讨该菌种产酶的最适培养条件。 1）、培养方法； 2）、工业大规模生产的工程和工艺条件； 3）、是胞内酶还是胞外酶？ 4）、分离纯化的方法和条件； 5）、酶纯度的鉴定。 三、固定化技术 （一）、概述： 问题：什么是固定化技术？它产生的背景和发展历史如何？ 固定化技术是通过化学或物理方法把酶或细胞束缚在一定的区域内，将之固定后再进行催化作用。 它产生的背景和发展历史： 1）、发现于1916年； 2）、诞生于60年代； 3）、成熟于70年代； 4）、实用化并大规模应用于80年代。 （二）、酶的固定化方法 自60年代以来，科学家对酶和细胞的固定化技术进行了大量的研究，迄今为止，具体的固定化方法多达一百种以上。根据所用载体及操作方法的差别可分为三类： 1、载体结合法（将酶定位于载体表面）： 1）、共价结合法：这是一种广泛应用的制备固定酶的方法。是将酶分子上非活性部位的功能基团与载体上的活性基团进行共价结合的方法。 在用共价结合法进行酶固定时，首先是利用化学方法将载体活化，再与酶分子上的某些基团反应，形成共价键，将酶结合在载体上。载体活化是重要问题，活化过程首先要考虑使载体获得能与酶分子特定基因产生特异反应的活泼基因，而且要求与酶偶联时反应条件要尽可能温和。 目前用于载体活化的方法有：酰基化、芳基化、烷基化及氨甲酰基化等反应。 2）、吸附法：利用载体表面性质或电荷作用将酶固定到载体表面的方法。 物理吸附法：将酶的水溶液与具有高吸附能力的载体混合，然后洗去不吸附的杂质和酶，可得到固定化酶。 主要靠范德华力、氢键、疏水作用及静电作用。这些作用是非特异性的，一般不单独使用，而常与交联法同时使用。 离子吸附法：是将解离状态的酶溶液与离子交换树脂混合后，酶蛋白通过离子键与树脂结合在一起。然后洗去末结合的杂质和酶，即可得到固定化酶。 这种方法 结合能力较强，如多糖离子交换剂每克载体吸附酶蛋白量为50—150mg。 影响载体吸附的因素较多。如溶液PH值、离子浓度、温度、酶蛋白浓度及载体比表面积等（具体的影响同学自学）。 优缺点：操作简单，可选用不同电荷和不同形状的载体，固定化过程可能同时实现了纯化，固定化酶的活力较高。 最适固定酶量无法估计，结合力不强，容易脱落，污染产物等。 2、包埋法 将酶或细胞定位于凝胶网格或微囊内的技术。主要用于水溶液性小分子底物的转化反应。 1）、凝胶包埋法：将酶 或细胞定在具有网格结构的高分子凝胶中。 常用的凝胶材料有聚丙烯酰胺、聚乙烯醇等合成高分子材料以及卡拉胶、海藻胶、琼脂、明胶及胶原等天然材料大分子。 基本操作过程： 优缺点（P111）： 2）、微囊包埋法：包有酶的微囊也称为人工细胞。制备微囊固定化酶的方法主要有界面聚合法、界面沉淀法和液中干燥法等。 常用界面聚合法即利用不溶于水的高聚物单体在油-水界面上聚合成膜的过程将酶包裹起来。 3、交联法 应用多功能或双功能试剂在酶与酶或酶与载体之间进行交联固定化的技术