免疫组化几种溶液的配制方法.pptVIP

免疫组化几种溶液的配制方法 1、PBS: 取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.2-7.4之间，若偏离此范围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。 2、TBS： 2.1 Tris缓冲液配方： （0.5 M pH7.6）Tris（三羟甲基氨基甲烷）60.57g1N HCL约420ml双蒸水加至1000ml Tris缓冲液配制方法： 先以少量双蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入HCl后，用HCl（1N）或NaOH（1N）将pH调至7.6， 最后双蒸水加至1000ml。 此液为储备液，4℃冰箱中保存。 2.2 TBS配方： Tris-HCI缓冲液（0.5M pH7.6）100mlNaCI8.5-9g (0.15mol/L)双蒸水加至1000ml TBS配制方法： 先以少量双蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。 3、枸橼酸盐缓冲液（Citrate buffer）： 3.1 储存液： A. 0.1M枸橼酸溶液：称取21.01g枸橼酸（C6H8O7·H20）溶于1000ml蒸馏水中。 B. 0.1M枸橼酸钠溶液：称取29.41g枸橼酸钠（C6H5Na3O7·2H20）溶于1000ml蒸馏水中。 3.2 工作液： 取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸馏水中，溶液pH值应为6.0?0.1 4、胰酶（Trypsin）： 4.1 ZLI-9011胰蛋白酶消化液： 常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合（1:3稀释），则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%（1:10稀释）至0.25%（1:1稀释）。 4.2 ZLI-9010胰蛋白酶： 取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。 5、胃酶（Pepsin）： 4%胃蛋白酶，用0.1mol/L HCL配制。 6、DAB： 6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit： 使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中，即可获得1ml DAB工作液，简单易用。 6.1 ZLI-9030 DAB： 6mgDAB溶于10mlTBS（0.05M pH7.6），再加入0.1ml浓度为3％的H2O2，过滤掉沉淀物，即可。 7、AEC： 4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液（pH5.2），然后加入0.15ml 3%H2O2，过滤掉沉淀物。 8、RIPA： 1×PBS，1%NP 40，0.5 sodium deoxycholate， 0.1% SDS（此液体可长期保存）。以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入RIPA中。 8.1 10mg/ml PMSF异丙醇溶液（用量为10ml/ml） 8.2 Aprotinin（Sigma产品，用量为30ml/ml） 8.3 1000mM sodium orthovanadate冷冻液 （用量为10ml/ml） 9、Blotto A： 常规使用1×PBS，5% milk，0.05% Tween 20。 10、Blotto B： 与Phosphotyrosine抗体共用，1×PBS，1% milk，0.05% Tween 20。部分实验中milk可完全去除，但可能引起背景增高。 * *