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侧柏叶中黄酮抗疲劳作用研究 　　摘要：从侧柏（Platycladus orientalis）叶中提取黄酮，分1.0、2.0 g/kg两个剂量组给小鼠灌胃，30 d后测定小鼠力竭游泳时间、血清尿素氮（BUN）、肝组织丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）含量。结果表明，与对照组相比，侧柏叶黄酮处理组小鼠力竭游泳时间极显著延长，且高、低剂量组间差异极显著；侧柏叶黄酮高、低剂量组BUN、MDA含量显著下降，SOD含量极显著升高，但高、低剂量组间各项生理指标差异不显著。 　　关键词：侧柏（Platycladus orientalis）叶；黄酮；提取；小鼠；抗疲劳 　　中图分类号：R285.5；S791.38 文献标识码：A 文章编号：0439—8114（2012）19—4342—02 　　机体剧烈运动后会产生大量H+、自由基、乳酸等影响细胞正常代谢的物质，从而导致机体发生运动性疲劳[1]。如果不能及时有效地消除疲劳，不仅会影响体育锻炼的健身效果，严重时还有可能引起机体的病理性变化，使机体健康受到一定程度的损害。体外实验证明，类黄酮具有自由基抑制活性，且不同种类的类黄酮对自由基清除作用不同[2]。侧柏（Platycladus orientalis）系柏科侧柏属常绿乔木，在中国分布极广，其含有的黄酮类化合物、鞣质和挥发油等有效成分具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗氧化等作用[3]。研究侧柏叶黄酮体内抗运动性疲劳作用及其对疲劳小鼠自由基代谢的影响，可为纯天然抗疲劳药物的开发提供理论及技术保证。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　挑选清洁级雄鼠30只作为试验动物，由江西省医学实验动物中心提供。 　　侧柏叶粗粉，市售；无水乙醇、正丁醇和乙酸乙酯均为分析纯试剂；水为蒸馏水。WF—4000C常压微波快速反应系统（上海屹尧仪器科技发展有限公司）；EYELAN—1001旋转蒸发仪（东京理化器械株式会社）；SHZ—JⅡA循环水式真空泵等。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 侧柏叶中黄酮类化合物的提取[4] 称取10 g侧柏叶粗粉，加入石油醚适量，加热回流1 h脱脂。挥干溶剂后按1∶20的体积比加入体积分数60%的乙醇溶液，以385 W的微波功率处理30 s，间隔60 s后再处理30 s，共处理4 min，趁热抽滤。按同样条件重复提取1次，合并滤液，减压蒸馏乙醇得浸膏。将浸膏依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，上清液用旋转蒸发仪真空浓缩至干，得淡黄色粉末，即为侧柏叶中黄酮类化合物。 　　1.2.2 侧柏叶黄酮抗疲劳性能的测定 设侧柏叶黄酮低剂量组（1.0 g/kg）、高剂量组（2.0 g/kg）两个处理组，每组10只小鼠，按相应剂量经口灌胃，连续灌药30 d，并设置对照组。小鼠均笼养，正常饮食，每周称体重1次，末次给药1 h后将对照组、黄酮实验组小鼠尾根缚以自身体重5%的重物，让其在50 cm×50 cm×40 cm、水深（30±2）cm的水槽中游泳，室温22～24 ℃、水温30 ℃，观察并记录小鼠入水游泳至力竭时间（力竭标准是小鼠沉入水底10 s不浮出水面，捞出后在平面不能进行翻正反射[5]）。运动后正常饮食，休息24 h后用脱颈法处死。 　　1.2.3 生理指标的测定 ①小鼠血清尿素氮（BUN）含量的测定。建立小鼠运动性疲劳模型后，在其休息24 h后采血，血液于4 ℃冰箱静置2 h，2 500 r/min离心15 min，取血清，采用二乙酰一肟法测定BUN含量。②小鼠肝组织SOD和MDA含量的测定。小鼠造模后处死，精确称取固定部位肝组织，以9 mg/mL NaCl溶液冲洗后用滤纸吸干，准确称量0.5 g置于试管中，加入5 mL预冷的9 mg/mL NaCl溶液于试管中，用组织匀浆机制成0.1 g/mL的匀浆，3 500 r/min离心15 min，取上清，测定MDA含量。用预冷的9 mg/mL NaCl溶液将0.1 g/mL的肝匀浆配制成10 mg/mL的肝匀浆，静置，取上清，测定SOD的含量。 　　1.2.4 数据分析 所有数据以x±s表示，采用SPSS 14.0软件进行t检验。 　　2 结果与分析 　　2.1 侧柏叶黄酮对小鼠力竭游泳时间的影响 　　各处理组小鼠力竭游泳时间测定结果见表1，可以看出，运动对照组小鼠力竭游泳时间极显著短于侧柏叶黄酮处理组（P0.05）。 　　3 小结与讨论 　　运动性疲劳是机体经过长时间的运动后，生理和心理过程不能保持特定水平的机能和维持预定的运动强度，从而导致运动能力下降的一种状态[6]。有关运动性疲劳的实验结果表明，随着运动时间的延长，体内可利用的CP、ATP、糖原、血糖等能源物质减少，机体不得不动员分解脂肪，产生脂肪酸供能，甚至分解蛋白质，代谢产能并生成BUN，以弥补体内能量物质的不足[7]。运