吉林白鹅α干扰素基因克隆与序列分析.docVIP

吉林白鹅α干扰素基因克隆与序列分析 　　摘要：从吉林白鹅（Anser cygnoides）肝脏组织提取基因组DNA，应用Primer 5.0软件设计一对加入EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的特异性引物，PCR扩增得到α干扰素基因（IFN-α），将PCR产物克隆至pMD18-T克隆载体，转化DH5α感受态细胞，挑取阳性菌落进行鉴定和测序。结果表明，IFN-α已被成功克隆。序列分析结果显示该基因序列与GenBank中已知的狮头鹅（A. anser）IFN-α序列（登录号HQ009755）同源性为99.5%。 　　关键词：吉林白鹅（Anser cygnoides）；α干扰素基因；克隆；序列分析 　　中图分类号：Q785；S835 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2012）21-4899-03 　　Cloning and Sequence Analysis of Interferon-α Gene in Jilin White Goose 　　LI Gong-mei1，LI Mao-hui2，YAN Jin-ming2，LI Yu-mei3，LIU Ke-yue4，QIAN Ai-dong1 　　（1.College of Animal Science and Technology， Jilin Agricultural University， Changchun 130118， China； 　　2.Jilin China Tai Enterprise Co.， Ltd.， Changchun 130033， China；3. Animal Husbandry and Veterinary Medicine， Jilin University， Changchun 130062，China； 4. School of Basic Medical Science， Jiujiang University， Jiujiang 332000， Jiangxi， China） 　　Abstract： The interferon-α gene（IFN-α）fragment was amplified with a pair of specific primers within BamHⅠ and EcoRⅠ restriction sites by PCR with the genome DNA extracted from liver of Jilin white goose（Anser cygnoides）. PCR product was cloned into vector pMD18-T and used to transform DH5α competent cell. Sequential analysis showed that the IFN-α was successfully cloned. Its homogeneity with reported A. anser IFN-α gene in GenBank（Accession No. HQ009755） was 99.5%. 　　Key words： Jilin white goose（Anser cygnoides）； IFN-α gene； cloning； sequence analysis 　　干扰素（Interferon，IFN）是一种干扰病毒繁殖的免疫活性细胞因子[1]，其中α干扰素（IFN-α）可抑制感染细胞中病毒mRNA的翻译，并促使病毒mRNA降解，能提高细胞表面MHCⅠ类分子的表达水平，有助于向T细胞递呈抗原，引起靶细胞的溶解，并可增强NK细胞对病毒的杀伤能力[2]。目前人[3]、狗[4]、猪[5]、鸡[6，7]、鸭[8]等的IFN序列均已被克隆，并进行了相应的研究及临床应用，关于鹅（Anser cygnoides）IFN的报道较少，本研究参照狮头鹅（A. anser）[9]等IFN的报道，利用动物???因组试剂盒提取鹅肝脏中的总DNA，采用PCR技术克隆获得吉林白鹅IFN-α基因，并对其进行序列测定分析，以期为进一步研究鹅IFN的分子生物学特性、抗病毒作用机理及研制防治鹅病毒性疾病的新型制剂奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　实验动物为教育部动物生产及产品质量安全重点实验室饲养的2月龄吉林白鹅。 　　E. coli DH5α由吉林农业大学生命科学实验室提供；pMD18-T载体、Taq DNA聚合酶、SacⅠ、 XhoⅠ、琼脂糖、dNTPs、X-Gal、T4 DNA Ligase购自宝生物工程（大连）有限公司；DNA Marker购自天根生化科技（北京）有限公司；氨苄青霉素、DNA凝胶回收纯化试剂盒购自杭州维特