基于核磁和质谱分析技术代谢组学在癌症诊断中应用.docVIP

基于核磁和质谱分析技术代谢组学在癌症诊断中应用 　　摘 要 本文对近年来用于癌症诊断的新方法——代谢组学及其在该领域内的应用进行了简要介绍。代谢组学通过定性与定量测量生物样本（血液、尿液、组织等）中数以千计的小分子代谢物，可灵敏地反映代谢组中与病理状态有关的细微变化，从而可为癌症的早期诊断及更好地理解癌变过程提供一种新颖的思路。本文还讨论了代谢组学与系统生物学中其它一些组学在癌症检测上的关联，介绍了一些用代谢组学进行不同癌症的诊断、治疗监测以及药物开发的前期研究工作，并探讨了用于临床癌症诊断的代谢组学方法所面临的机遇、挑战与未来发展方向。 　　关键词 核磁共振波谱； 质谱； 代谢轮廓分析； 代谢组学； 癌症诊断； 肿瘤学； 评述 　　1 引 言 　　癌症是世界范围内影响人类健康的主要疾病之一[1]。在美国每4名死者中就有一名死于癌症；在中??，恶性肿瘤也是城乡居民中死亡率最高的疾病[2]。前列腺癌、乳腺癌、肺癌和结肠癌是最常见的癌症。目前，癌症的最终诊断仍需活体组织切片检查，并辅以X光、断层扫描（CT）、核磁共振成像（MRI）检查，以确定肿瘤的位置和大小。过去十年间，可用于癌症的诊断、监测和治疗的分子水平标记物已逐渐引起人们的关注[3]，比如，通过血液分析可检测一些蛋白质组和基因组的肿瘤标记物。 　　众所周知，癌症的早期准确诊断不仅能够提高患者的生存率，而且可以帮助临床医生确定最适合于病人的治疗策略，从而避免治疗不足或过量。Lu等[4]对2263例乳腺癌患者开展了13项相关研究，结果发现，若能尽早预警乳腺癌的复发，每1000名患者中就会多有5～8人存活，从而可使死亡率（十年）降低17%～28%。然而，传统的检测手段存在局限性。例如，乳腺X射线摄影诊断技术会存在20%～40%的误判，这在出现早期或较小肿瘤的年轻女性患者身上尤为突出。对于大多数案例，蛋白质和基因标记物存在灵敏度或者特异性不够高的问题，从而无法真正实现癌症早期准确诊断。因此，为进一步提高人们生活和健康水平，迫切需要建立灵敏度高、特异性好的癌症早期诊断方法。 　　目前，越来越多的人致力于发展准确度更高的癌症早期诊断新技术。代谢组学，又称代谢轮廓分析，目前发展迅速，其可通过研究生物样品内代谢物的水平及变化，了解不同生物系统的复杂生理和病理的状况[5～9]。由于代谢标记物可灵敏地反映机体的生理状态，因此它们可用于癌症的早期诊断，并最终有助于改善癌症的治疗效果。鉴于代谢组学所关注的小分子代谢物是基因和蛋白质的终端产物，代谢组学也可以被视作系统生物学领域的一个下游组学，并可以与其它组学，如基因组学和蛋白质组学，进行整合研究和互相验证，从而对复杂生物系统进行全面而透彻的了解。在癌症诊断方面，早在19世纪20年代，著名的Warburg效应就已经指出癌细胞的新陈代谢过程发生了改变[10～12]。肿瘤细胞的生长速度远大于正常细胞的原因有可能来自于能量代谢的差别。癌细胞会偏向使用糖解作用取代一般正常细胞的有氧循环，所以癌细胞使用粒线体的方式与正常细胞会有所不同。由此可见，尽管癌变系由基因突变所引发，但研究DNA损伤所引发的代谢变化及其与肿瘤发生之间的关联同样重要，这将有助于理解肿瘤发展过程中生物系统内代谢平衡发生的转变，有助于发现新的药物靶点以及与疾病相关的诊断、治疗和预测生物标记物。因此，代谢组学为癌症的早期准确诊断及更好地理解癌变过程提供了一种全新途径。 　　图1为一个典型的代谢组学研究的流程。核磁共振（NMR）和质谱（MS）是代谢组学中两个最常用的分析技术。核磁共振重复性好且具有较强的结构解析能力。与液相色谱（LC）或气相色谱（GC）联用，质谱（MS）在代谢组学中也是一个用于定性和定量研究的有力工具。近几年来，质谱学中敞开式电离技术（Ambient mass spectrometry）也得到了迅猛发展，其中包括电喷雾解析电离质谱（DESI-MS）、电喷雾萃取电离质谱（EESI-MS）、实时在线分析质谱（DART-MS）等[13～17]。敞开式电离技术几乎无需样品预处理，可快速并高通量地对生物复杂基体样品进行定性和定量分析。多种质量分析器，如四级杆（Q）、三重四级杆（QQQ）、飞行时间（TOF）、四级杆飞行时间（Q-TOF）、轨道离子阱（Orbitrap），均已频繁地应用到代谢组学研究领域中。另外，代谢组学数据通常较复杂，因此需要灵活运用一些多变量统计学方法进行数据挖掘。作为典型的无监督方法，主成分分析（PCA）可直接对样本分组进行观察，并提供潜在生物标记物的信息。基于训练样本集，偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）、逻辑回归（Logistic regression）、支持向量机（SVMs）[18]等有监督的方法还可建立预测模型以用于未知样品的分析。需要指出