碳粒廓清实验课件.pptVIP

小白鼠碳粒廓清实验 一、目的要求 学习碳廓清实验的原理与方法 ； 进一步练习小鼠的眼眶后静脉丛注射和采血方法。 化学物对免疫系统的影响： 免疫抑制 超敏反应 自身免疫反应 机体的免疫系统: 免疫器官或组织 中枢免疫器官（骨髓和胸腺） 外周（脾脏和淋巴结） 免疫细胞 免疫分子 免疫器官或组织要反应机体的免疫功能，包括很多方面，比如体液免疫功能，细胞免疫功能，NK和巨噬细胞的吞噬功能等等，通常用一组实验来说明机体的免疫功能(不能单凭一个实验)。 检测的方法也有很多，比如免疫器官的重量和脏器系数；T 、B淋巴细胞的分型（流式细胞仪）；放射免疫方法、碳廓清实验等。 二、 基本原理 一定浓度的碳粒经小鼠眼眶后静脉丛注射进入血液，经血流带到肝，脾等处，而被这些部位的巨噬细胞吞噬清除。 在一定浓度范围内，碳粒的清除速率与其剂量成呈指函数关系，即吞噬速度与血液中碳粒浓度成正比，而与已吞噬的碳粒量成反比。 若以血中碳粒浓度的对数值为纵坐标，时间为横坐标，两者则呈直线关系，其斜率（k）值表示吞噬速度，即未经校正的吞噬指数。这是因为小鼠肝，脾重量不等，故k值不同，所以，一般以校正的吞噬指数α表示，反映了每单位组织重量的吞噬活性。计算公式如下： α＝体重/(肝重+脾重）×K1/3 图1　吸光度(对数值)—时间曲线 K=（lgOD1-lgOD2）/ (t2- t1) 三、材料 健康昆明种小鼠，6-8周龄，体重18-22g。 印度墨汁：以生理盐水稀释3-4倍（临用前配制） 0.1% Na2CO3： 0.1g Na2CO3加双蒸水至100ml （临用前配制） 肝素：250u/ml 天平、注射器、镊子、手术剪，滤纸，毛细管、血色素吸管（或硬质玻璃尖嘴滴管）、小试管、载玻片、玻璃平皿、计时器、7230分光光度计 四 操作步骤 小鼠称重 用印度墨汁，按小鼠每10g体重0.05ml计算，经左眼眼眶后静脉丛注入体内，注射完毕，立即计时(注意注射的深度和力度）。 注入墨汁后2~20分钟内选两个时点（例如2分钟，10分钟，可以自定时间，但两次间隔时间要长一些），用预先肝素处理的毛细管分别从右眼眶静脉丛取血20μl，置入盛有2ml Na2CO3溶液的试管中，摇匀。0.5cm比色杯在721分光光度计600nm波长处测光密度（OD），用0.1％Na2CO3溶液为空白。 处死小鼠，取肝，脾称重（若肝脾皆变黑，说明注射成功）。 五 计算与结果 按下式计算吞噬指数α K=（lgOD1-lgOD2）/ (t2- t1) K为未经校正的吞噬指数。 OD1为t1（例如2分钟）血标本的OD值 OD2为t2（例如10分钟）血标本的OD值 吞噬指数α＝体重/(肝重+脾重）×K1/3 六 注意事项 静脉注入碳粒的量，取血时间，取血量一定要准。 墨汁经放置，碳粒沉于瓶底，临用前应摇匀。 因每只小鼠要连续取血数次，所以每次眼眶内取血时，应尽量减少出血。