微生物学检验课件细菌形态学检查.ppt

细菌形态学检查 南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心 教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生 实验课时：4学时 课程类型：专业实验课 课程要求：必修 每组人数：1人 实验目的和要求 掌握革兰染色法的原理、方法及结果判断。 掌握显微镜油镜的使用与保护、细菌涂片制备的方法。 熟悉不染色标本检查法。 学会观察细菌的基本形态和特殊结构。 了解实验室规则及注意事项。 实验内容 实验室规则及注意事项。 显微镜的使用与保护。 细菌不染色标本检查。 细菌涂片及革兰染色。 细菌基本形态、特殊结构观察。 一、实验室规则及注意事项 不得在实验工作区内吃、喝及抽烟，以及装卸隐形眼镜和上妆等。实验用的冰箱中不得储存饮料、食物。 在实验操作时请穿好实验防护衣及其它合适的防护服。实验室中不宜穿凉鞋、露趾鞋。操作感染性、有毒物质或动物时，必须戴手套。不宜将实验衣、手套或其它个人防护装备穿着到实验室以外的场所。 实验工作台应每日清理，若有污染发生应立即进行消毒；所有设备在使用后均必须及时清理和处理，以保持无污染状态。 所有污染物－玻璃器皿、动物笼、实验装置等，必须先经过消毒处理 (如：高压蒸气灭菌或化学杀菌处理)，再行清洗或重复使用。废弃物需经适当之废弃物处理流程处置。 在接触传染性物质、化学物质和动物后脱掉手套，切记洗手。 严格无菌操作，树立良好无菌观念。 在遇到不能处理的问题时，请立即与本实验室人员联系以便及时采取相应的处理或消毒措施。 二、显微镜的使用与保护 普通光学显微镜用油镜放大1000倍，一般细菌均能清楚看到。 暗视野显微镜用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动观察。 相差显微镜主要用于检查不染色活细菌的形态及某些内部结构。 显微镜油镜的使用(一) 低倍镜对光，将光线调至最强程度(聚光器提高，光圈全部开放)。 转动粗调节器使镜筒上升，滴香柏油1小滴(不要过多，不要涂开)于接物镜正下方标本上。 转动接物镜转换盘，使油镜头于镜筒下方。 俯身镜旁侧面在肉眼的观察下，转动粗调节器使油镜头徐徐下降浸入香柏油内，轻轻接触玻片为止。 显微镜油镜的使用(二) 慢慢转动粗调节器，使油镜头徐徐上升至见到标本的物象为止。 转动微调节器，使视野物象达到最清晰的程度。 左手徐徐移动推进器，并转动微调节器以观察标本。 标本观察完毕后，转动粗调节器将镜筒升起，取下标本玻片。立即用擦镜纸将镜头上的香柏油擦净。 显微镜的保护(一) 显微镜在从木箱中取出或装箱时，右手紧握镜臂，左手稳托镜座，轻轻取出。不要只用一只手提取，以防显微镜坠落，然后轻轻放在实习台上或装入木箱内。 显微镜放到实习台上时，先放镜座的一端，再将镜座全部放稳，切不可使镜座全面同时与台面接触，这样震动过大，透镜和微调节器的装置易损坏。 显微镜的保护(二) 显微镜须经常保持清洁，勿使油污和灰尘附着。如透镜部分不洁时，用擦镜纸轻擦，如有油污，先将擦镜纸蘸少许二甲苯拭去。 显微镜用完后，取下标本片，经聚光器降下，再将物镜转成“八”字形，转动粗调节器使镜筒下降，以免接物镜与聚光器相碰。 三、不染色标本检查 应用：主要用于观察活菌的动力和运动方式。 常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野映光法。 1、压滴法 2、悬滴法 四、细菌涂片制备和革兰染色 细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类。 （一）涂片制备 涂片： 干燥： 固定：通常用火焰加热固定，将已干燥的涂片在火焰中迅速通过3次，以手背皮肤接触玻片不烫为佳。 （二）革兰染色 最经典、最常用的染色方法。 通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G-菌两大类。 1、染色原理 细胞壁通性学说：与肽聚糖结构有关。 化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关。 等电点学说：与细菌所带电荷有关。 2、染色方法 2、染色方法 3、革兰染色结果 紫色－－革兰阳性菌 红色－－革兰阴性菌 4、影响革兰染色的因素 操作因素 涂片的厚薄；脱色时间的长短。 染液因素 卢戈碘液放置时间过长；95％乙醇挥发；结晶紫与草酸铵混合时间太长。 细菌因素 细菌种类；细菌菌龄等。 五、细菌的基本形态和特殊结构观察 细菌基本形态－球菌 细菌基本形态－杆菌 细菌基本形态－弧菌 细菌特殊结构－芽胞 细菌特殊结构－荚膜 细菌特殊结构－鞭毛 * * 载玻片 细菌悬液 盖玻片 镜检 盖玻片 细菌悬液 凹玻片 涂片 干燥 固定 染色 水洗、吸干 镜检 制备涂片标本→染色 结晶紫液 初染 卢戈碘液 媒染 95％乙醇 脱色 稀释复红 复染 1min 水洗、甩干 30S～1min 水洗、甩干 1min 水洗、甩干 影响革兰染色的关键步骤是脱色。 革兰阳性菌 革兰阴性菌 *