芬太尼对MCF—7乳腺癌细胞增殖及迁移和凋亡影响.docVIP

芬太尼对MCF—7乳腺癌细胞增殖及迁移和凋亡影响 　　【摘要】 目的：探讨芬太尼对MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法：将MCF-7乳腺癌细胞分为6组，正常对照组（C组），芬太尼组（F1组、F2组、F3组、F4组、F5组），芬太尼的终浓度分别为1、0.1、0.01、0.001、0.0001 μmol/L，在含去激素新生小牛血清的无酚红培养基培养条件下，分别采用MTT法、划痕实验、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒结合流式细胞仪观察芬太尼对MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。结果：芬太尼组各组OD值、迁移距离和凋亡率与C组比较差异无统计学意义（P0.05）。结论：在含去激素新生小牛血清的无酚红培养基培养条件下，芬太尼对MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡无明显影响。 　　【关键词】 芬太尼； MCF-7乳腺癌细胞株； 增殖； 迁移； 凋亡 　　阿片类药物因其强大的镇痛作用，在癌痛的治疗中起着非常重要的作用[1]。目前研究认为阿片类药物除对癌痛患者具有镇痛效果以外，对癌细胞的增殖、转移和凋亡也产生一定影响[2-4]。阿片类中的代表药物芬太尼，广泛用于手术患者及癌痛患者的镇痛。国内张咸伟等[5]研究表明，芬太尼抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖且具有时间和剂量依赖性。其研究中采用未去除雌激素的新生小牛血清进行实验。Berthois等[6]研究发现，酚红、雌激素都会对MCF-7细胞的增殖产生影响，建议在研究MCF-7细胞的增殖时尽量排除这些因素的干扰。所以本实验拟在去激素新生小牛血清及无酚红培养基条件下研究芬太尼对MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。以观察在不同培养条件下，芬太尼对MCF-7乳腺癌细胞的影响是否存在差异。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 MCF-7乳腺癌细胞由广西医科大学覃怡师姐惠赠。含酚红高糖DMEM培养基购自Hyclone公司；无酚红高糖DMEM培养基购自Wisent公司；新生小牛血清购自杭州四季青公司；活性炭购自西陇化工股份有限公司；葡聚糖4万南购自京都莱生物技术有限公司；MTT粉末及二甲基亚砜购自Sigma公司；Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒购自invertrogen公司；芬太尼购自宜昌人福药业有限责任公司；倒置相差显微镜为Olympus公司；酶标仪为美国Thermo公司；流式细胞检测仪为Beckman Coulter公司。 　　1.2 细胞的培养 细胞培养于含10%新生小牛血清、100 μg/mL链霉素、100 U/ml青霉素的含酚红的高糖DMEM培养基中，在37 ℃、5%CO2培养箱中培养，当细胞达80%～90%融合时传代，以1：2的比例传代。在进行实验处理时更换为含10%去激素新生小牛血清的无酚红高糖DMEM培养基，去激素新生小牛血清的制备参照考朱毅等[7]文献中的方法获得。实验均采用对数生长期细胞。 　　3 讨论 　　乳腺癌为女性常见恶性肿瘤，与女性健康密切相关。乳腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡与乳腺癌的生长和转移密切相关，因此一直是研究的热点。石利涛等[8]从治疗药物的角度，研究发现干扰素-γ、干扰素-α2b的联合应用可诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡。本实验拟从癌痛镇痛的角度，研究常用镇痛药物芬太尼对雌激素受体阳性的MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响，为临床研究奠定基础。 　　本实验研究发现，在含去激素新生小牛血清的无酚红培养基培养条件下，芬太尼对MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡无明显影响。张咸伟等[5]研究发现，芬太尼浓度大于0.1 μmol/L时，MCF-7乳腺癌细胞增殖活性明显下降。赵海燕等[9]研究认为，芬太尼抑制MCF-7乳腺癌细胞侵袭。丁汉琳等[10]研究发现，芬太尼大于5 μmol/L时，MCF-7凋亡细胞明显增加。本实验与以上研究结论产生差别的主要原因考虑为培养条件不一致导致的。本实验采用的是去激素新生小牛血清和无酚红培养基，张咸伟、赵海燕等采用的是未去除激素的新生小牛血清。Berthois等[6]研究发现，酚红、雌激素会对雌激素受体阳性的MCF-7细胞的增殖产生影响，建议在研究MCF-7细胞的增殖时尽量排除这些因素的干扰。因此本实验采用去激素新生小牛血清和无酚红培养基，拟尽量减少干扰因素的影响，研究芬太尼对MCF-7细胞的直接作用。Maneckjee等[11]研究发现，在含激素新生小牛血清中，吗啡具有抑制MCF-7细胞增殖的作用，但在去除了新生小牛血清中的激素后，吗啡并不表现出抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖的作用。并进一步发现添加17β-雌二醇可以增加吗啡对MCF-7细胞的增殖抑制效应。但是雌激素通过何种途径影响MCF-7乳腺癌细胞对吗啡的敏感性的机制待于进一步研究[11]。张咸伟、丁汉琳等进一步研究