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薯莨提取物体外抗人型支原体作用 　　[摘要] 目的 从中药薯莨中提取具有体外抗人型支原体作用的成分，并测定其最小抑菌浓度，为开发薯莨提供依据。 方法 采用超声提取法醇提，D101大孔树脂梯度洗脱的方法得到不同的洗脱流分，经固体培养法初筛具有体外抑制人型支原体作用的流分，再经液体-固体联合培养法测定其MIC范围和MIC50值。 结果 薯莨正丁醇部位经D101大孔树脂梯度洗脱，其中25%乙醇洗脱流分具有较好的体外抑制人型支原体的作用，其MIC范围是（16/32～128） mg/mL，而MIC50为32 mg/mL。 结论 薯莨具有抗人型支原体作用的开发和研究价值。 　　[关键词] 薯莨；人型支原体；最低抑菌浓度 　　[中图分类号] R285 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）26-0102-02 　　泌尿生殖道支原体感染是非淋菌性尿道炎（NGU）的重要病因之一。近年来，泌尿生殖道支原体感染受到普遍重视。但随着临床上日趋严重的抗菌药物滥用，泌尿生殖道支原体耐药性也不断发生着变化。因此，从中草药中寻找有效治疗药物越来越受到重视。薯莨（Dioscorea cirrhosa Lour.）是薯蓣科薯蓣属的一种藤本植物，其药用有效成份主要包括块茎中的酚类、苷类等。本品味微苦、涩，性微寒，药理作用包括活血止痛、止血止痒、解毒抗菌[1]、收缩子宫平滑肌[2]和治疗应激性溃疡[3]等。目前国内外对中药薯莨的研究非常少，而有关其有效成份方面的研究则更少。近年来本课题组的研究表明，薯莨提取物具有降压作用[4]。同时，薯莨浸膏对泌尿生殖道人型支原体（Mycoplasma hominism，MH）也有较强的抗菌作用，并找到薯莨抗泌尿道人型支原体作用的有效部位，为临床上治疗泌尿生殖道支原体感染筛选新药和有效开发中草药薯莨提供依据，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　1.1.1 培养基 A7固体培养基购自法国梅里埃生物公司。人型支原体液体培养基按照文献[5]方法配制。1：1牛心消化液、10%新鲜酵母液、20% 新生小牛血清、0.002%酚红、青霉素20 000 U/L。加0.1%精氨酸，pH调至6.5[6]。 　　1.1.2 支原体株 从泌尿生殖道感染患者的标本中分离获得30株人型支原体（MH）菌株，经初步鉴定[5]，传代3次后，保存于-70℃备用。实验菌液：取保???的备用菌液，在室温下融化，用人型支原体液体培养基按1：100稀释，37℃培养24～48 h后达106颜色变化单位（color changing unit， CCU）/0.1 mL作为接种物[6]。 　　1.1.3 提取物的制备 ①原药处理 取8.1 kg薯莨块茎（采自湖南省平江县，经南华大学生药学鉴定，标本存放于南华大学药物药理研究所），洗净，干燥，粉碎。在75%乙醇中浸泡4 h，超声回流提取4次，得总浸膏1 612.5 g。取浸膏850.0 g（相当于原药材4 269.8 g），加水4 L，充分搅匀，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。萃取液减压蒸馏浓缩，挥干，称重，得石油醚部位13.17 g，乙酸乙酯部位247.05 g和正丁醇部位445.00 g。② D101大孔树脂分离 活性跟踪结果显示正丁醇部位具有体外抗人型支原体的活性。取正丁醇萃取成份320.0 g（相当于原药材3 070.4 g）上D101大孔吸附树脂柱（5.5×120 cm），依次用水和不同浓度（梯度为5%）的乙醇洗脱，每浓度洗6个柱体积（BV）。收集各浓度洗脱流分，浓缩，挥干。5%、10%、15%、25%、30%、35%洗脱流分依次命名为A、B、C、D、E、F。称重分别为24.61 g、18.14 g、12.10 g、24.75 g、12.48 g、6.20 g。 　　1.2实验方法 　　1.2.1 初筛实验 取相同重量各洗脱部位组分分别溶于1%二甲基亚砜（DMSO）溶液配成相同浓度（预实验用1% 二甲基亚砜，没有发现有抗人型支原体的作用）。取A7固体培养基，37℃恒温箱复温10 min，将培养基均分为三个区，在不同区中央滴入同一洗脱部位的1% DMSO溶液50 μL，倒置10 min，无菌接种环在药液区内均匀接种MH菌株，CO2培养箱培养，选择1% DMSO溶液作为阴性对照，0.1 g/mL阿奇霉素溶液作为阳性对照。培养96 h后，取出培养基，倒置，在10倍物镜显微镜下，观察视野中煎蛋样菌落，顺时针方向在三个区中各取5个视野，记录菌落数[7]。根据A7固体培养基说明书，以平均每个视野中菌落数 　　1.3统计学方法 　　采用SPSS13.0统计学软件，计量资料采用均数加减标准差表示，多组间比较采用方差分析，两两采用t检验。P45℃）。E和F组分为