贝那普利对肝纤维化大鼠TGF—β1和α—SMA影响研究.docVIP

贝那普利对肝纤维化大鼠TGF—β1和α—SMA影响研究 　　[摘要] 目的 研究贝那普利对大鼠肝纤维化程度及对肝纤维化大鼠TGF-β1和α-SMA表达的影响。 方法 建立40% CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型，42只大鼠分为对照组（n=10）、模型组（n=16）、观察组（n=16）。对3组大鼠肝组织进行HE染色、网状纤维染色、免疫组织化学染色，观察肝组织病理变化、纤维增生及TGF-β1和α-SMA的表达情况。 结果 模型组的肝纤维化程度、TGF-β1阳性表达、α-SMA阳性表达计分明显高于对照组，差异有统计学意义（P 　　[关键词] 肝纤维化；TGF-β1；α-SMA；贝那普利 　　[中图分类号] R575.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）12（c）-0030-04 　　肝纤维化是肝脏对多种原因引起的慢性肝损伤的反应，若持续存在可导致肝硬化。肝星形细胞（HSC）的活化、细胞外基质（ECM）合成增多及其降解不足是肝纤维化形成的中心环节。TGF-β1和α-SMA的表达与肝纤维化的发生、发展有密切联系。本研究通过应用贝那普利对肝纤维化大鼠的TGF-β1和α-SMA表达的影响，以了解贝那普利对肝纤维化的治疗作用，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物与材料 　　实验动物为42只健康雄性Sprague Dawley（SD）大鼠，体重200～260 g，江西中医学院动物中心购买。所有SD大鼠按常规条件：室温（21±2）℃，湿度（50±5）%，光照12 h/d，普通饲料喂养，自由进水，2次/周换垫料。大鼠TGF-β1单克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司产品，α-SMA单克隆抗大鼠抗体为武汉博士德生物工程有限公司产品，0.1 ml/瓶。贝那普利由海南省海口市先声药业有限公司提供，批准文号：国药准字 　　1.2 实验方法 　　将42只大鼠随机分为3组，对照组10只，模型组16只，观察组16只。模型组和观察组大鼠腹腔注射40% CCl4橄榄油溶液，首剂为0.5 ml/100 g，以后每次0.2 ml/g，2次/周。观察组从实验开始，贝那普利10 mg/（kg·d）灌胃，直到实验结束。对照组腹腔注射等量生理盐水，2次/周。1次/周测体重以调整剂量；于8周结束时统一颈椎脱臼处死，留肝组织作标本，制备石蜡切片。 　　1.3 病理学检查 　　肝组织用10%中性甲醛固定，常规进行HE染色、网状纤维染色、免疫组织化学染色，了??其病理变化、纤维增生及TGF-β1和α-SMA表达的情况。 　　1.4 评分标准 　　肝纤维化程度半定量积分采用王泰龄等[1]改进的Chevallier计分法进行评分（表1）。 　　表1 肝纤维化程度半定量积分 　　计分：L+P+2（N×W）；*标本内仅一细纤维隔，W计分0.5 　　1.5 判定标准 　　高倍镜下（×400）每张切片随机看10个高倍视野，每个视野计数≥300个细胞，结果判定标准：以细胞膜或胞质染呈棕褐色为阳性细胞，无着色为阴性。阳性细胞≤5%为0分；5%～10%为1分；10%～50%为2分；50%为3分。着色程度：无着色为0分（阴性），浅黄色为1分（弱阳性），棕黄色为2分（阳性），棕褐色为3分（强阳性）。按照两者乘积的积分进行统计分析：0分阴性；1、2分计为+；3、4分计为++；6、9分计为+++。 　　1.6 统计学方法 　　采用SPSS 13.0统计软件对数据进行分析和处理，计量资料以x±s表示，采用单因素方差分析，以P 　　表3 3组大鼠TGF-β1免疫组织化学染色结果的比较（分，x±s） 　　与对照组比较，*P 　　[9] Bataller R，Ginès P，Nicolás JM，et al.Angiotensin Ⅱ induces contraction and proliferation of human hepatic stellate cells[J].Gastroenterology，2000，118（6）：1149-1156. 　　[10] Tharaux PL，Chatziantoniou C，Fakhouri F，et al.Angiotensin Ⅱ activates collagen Ⅰ gene through a mechanism involving the MAP/ER kinase pathway[J].Hypertension，2000，36（3）：330-336. 　　[11] Marshall RP，McAnulty RJ，Laurent GJ.Angiotensin Ⅱ is mitogenic forhuman lung fibroblasts v