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阿维A对硬皮病小鼠治疗作用及机制研究 　　[摘要] 目的 研究阿维A（acitretin）对系统性硬皮病（SSc）小鼠皮肤及肺部纤维化的治疗作用，并通过检测小鼠外周血Th17/Treg相关因子白介素（IL）-17、IL-10、IL-6、转化生长因子（TGF）-β1水平，探讨阿维A治疗硬皮病可能的机制。 方法 24只雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、硬皮病组和阿维A组，硬皮病组和阿维A组给予博莱霉素皮下注射4周，阿维A组同时每天给予6 mg/kg的阿维A灌胃4周。4周后取注射部位皮肤及肺部制作组织病理切片，观察小鼠皮肤厚度及皮肤/肺部炎症。酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠血清IL-17、IL-10、IL-6、TGF-β1水平。 结果 阿维A组皮肤厚度、皮肤炎症评分、肺部炎症评分均明显低于硬皮病组[（140.25±20.24）μm比（191.88±40.95）μm，（0.75±0.01）分比（2.00±0.76）分，（1.38±0.52）分比（2.00±0.92）分，P 　　[关键词] 硬皮病；阿维A；IL-17；IL-6；IL-10 　　[中图分类号] R593.25 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）09（a）-0020-03 　　系统性硬皮病（systemic sclerosis，SSc）是一种以皮肤及内脏器官纤维化或硬化，最后发展至萎缩为特点的结缔组织病[1]。在我国结缔组织病中硬皮病的发病率高，病因及发病机制复杂，治疗手段有效。维A酸类药物在表皮分化、真皮重建及皮肤炎症中发挥重要作用，临床上主要用于治疗银屑病、痤疮及角化过度性皮肤病。近年来，维A酸的抗纤维化作用逐渐得到认识，文献报道阿维A可缓解硬皮病患者皮肤硬化，且对皮肤硬化为主的移植物抗宿主病（GVHD）有效[2-3]。本试验利用博来霉素构建小鼠硬皮病模型，观察阿维A对皮肤和肺部纤维化的治疗作用。 　　辅助T细胞17（Th17）是一种新的T细胞亚群，主要分泌白介素（IL）-17和IL-6，其在自身免疫病和过敏性疾病中发挥重要的免疫调节作用。调节性T细胞（Treg）与Thl7细胞均来源于共同的前体细胞CD4+T细胞，两者关系密切，Treg细胞主要分泌转化生长因子（TGF）-β和IL-10，在免疫耐受的诱导中发挥重要作用，抑制自身免疫性疾病的发生[4]。文献报道硬皮病患者存在外周血Th17/Treg细胞体系失衡，本研究通过检测小鼠外周血Th17/Treg相关因子IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β1，探讨阿维A治疗硬皮病可能的机制???为硬皮病的发病机制及治疗提供新的思路。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 实验动物 6周龄雌性SPF BALB/c小鼠，体重16～20 g，共24只，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，饲养于北京大学实验动物中心，置于清洁级环境，普通饲料和水饲养。 　　1.1.2 主要实验试剂 注射用盐酸博来霉素（BLM），15 mg/支，产自日本化药株式会社。阿维A胶囊，10 mg/粒，产自重庆华邦制药公司。小鼠IL-17、IL-10、IL-6、TGF-β1酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 动物分组、模型的建立及给药方法 24只小鼠随机分为对照组、硬皮病组和阿维A组，每组8只。实验前用脱毛膏将背部毛发去除，标记出一个1 cm×1 cm大小的注射区。参照文献[5]建立SSc动物模型：对照组以酸盐缓冲液（PBS）皮下注射，每次0.1 mL，每日1次，共4周；硬皮病组和阿维A组以300 μg/mL浓度的博莱霉素液皮下注射，每次0.1 mL，每日1次，共4周。同时，在开始皮下注射博莱霉素的当天，对照组、硬皮病组以0.9% NaCl灌胃，每日0.2 mL，阿维A组则用0.5 mg/mL的阿维A溶液按照6 mg/（kg·d）剂量灌胃（依照人体给药剂量0.5 mg/（kg·d）换算成小鼠的治疗剂量为6 mg/（kg·d），每日灌胃约0.2 mL。 　　1.2.2 标本的留取 最后一次注射、灌胃24 h后，小鼠通过眼眶动脉放血处死，收集血液1～2 mL，以3000 r/min离心20 min，吸取上层血清，用ELISA法检测IL-17、IL-10、IL-6、TGF-β1水平，按试剂盒操作说明书进行。取小鼠背部无毛皮肤及肺脏，投入10%甲醛溶液中固定、脱水、石蜡包埋，制作组织病理切片。 　　1.2.3 皮肤和肺部炎症、纤维化的观察及测定 皮肤及肺组织切片行HE染色，用病理图像分析软件测量皮肤厚度（表皮+真皮厚度），皮肤和肺部炎症按下述方法计分，0分：无；1分：少许；2分：轻度；3分：中度；4分：重度。由两名