高效液相示差折光法测定保健食品中水苏糖含量.docVIP

高效液相示差折光法测定保健食品中水苏糖含量 　　【摘要】目的创建测定保健食品中水苏糖的含量方法。方法色谱柱Agilent zorbax NH2（4.6 mm×250mm，5μm），柱温 25 ℃；流动相乙腈-水（69：31），流速1.0 mL·min-1；示差折光检测器，内部温度35℃。结果水苏糖的线性范围为2.06-20.6μg；加样回收率（n =5）为97.68%。结论本方法简便、灵敏、准确，可用于保健食品中水苏糖的含量测定和产品质量控制。 　　【关键词】高效液相示差折光法；水苏糖；含量测定 　　水苏糖是具有保健功能的大豆低聚糖的组成成分之一，且被称为大豆低聚糖的主要功效成分。水苏糖为四糖，是棉子糖的半乳糖用a-1，6 糖苷键和半乳糖相连接，因此水苏糖是低聚糖，它也是半乳糖类的一种，属于非还原糖。大豆低聚糖的主要成分是水苏糖，它的生理作用主要是通过加快双歧杆菌的繁殖速度以及增加其繁殖量，进而去调节肠道保持菌群的平衡[1]。因人体内将大豆低聚糖分解的消化酶 a-D-半乳糖苷酶较为稀少，因此他们可以避免被分解吸收从而直接到达大肠内被双歧菌用于增殖，是双歧杆菌的有效增殖因子。除此之外大豆低聚糖还具有对身体有益的多项生理功能如抑制病原菌、保护肝脏、降低血清胆固醇、降血压、增强人体免疫力等 [2]。在我国，市场上出现很多含水苏糖或大豆低聚糖类成分的提取物、这些保健食品有的进口有的国产名目不一，质量也良莠不齐。现在，对保健食品里大豆低聚糖含量的测定方法文献报道不多，总结起来主要的方法包括化学分析、层析、气相色谱以及高效液相色谱这四种[2-3]，就这四种方法而言，气相色谱法以及高效液相色谱法测定结果较为精准。将糖通过衍生化的方法转换成为可挥发的成分后再测定，这种方法我们称之为气相色谱法，然而用这种方法进行实验操作起来比较麻烦。相对来说高效液相色谱法操作起来更为便捷，已有文献对此报道[4-8]，但关于水苏糖的含量测定方法较为缺乏。我们为了更好地对一个产品进行评价以及更好的把握好质量关，故而采集了在国内市场上较为常见的几种含大豆低聚糖的保健食品，用RP-HPLC-RID的方法对产品中的水苏糖进行测定，得到了令人满意的结果。 　　1仪器与试??的选取 　　我们采用Waters 515高效液相色谱仪和2414示差折光检测器进行实验。水苏糖（批号：CRS52837）由（北京百灵威科技有限公司）所生产，其纯度在99%以上。实验中除乙腈为色谱纯以外其他均为分析纯，使用纯净水，过Millipore 0.22μm滤膜。共在五个市场常见含水苏糖保健食品用作实验中。 　　2色谱条件的设定 　　色谱柱Agilent zorbax NH2（4.6 mm×150mm，5μm），柱温设定25 ℃；流速为1.0mL·min-1；流动相通过流动相水-乙腈（31﹕69）等度来对其洗脱，设示差折光检测器内部温度为35℃；理论塔板数以蔗糖计算高于2200。色谱图见图1。 　　3溶液的制备 　　3.1取一定量的水苏糖对照品，称取过程要保证精准度，然后将流动相溶液加入制备成水苏糖1.03 mg·ml-1溶液，这就是我们实验中要用到的对照品溶液。 　　3.2取样品各0.5g置于25ml量瓶中，称取过程也要保证精准。将流动相溶液加入并时期充分均匀混合，再用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，这就是我们实验中要用到的供试品溶液。 　　4方法与结果的分析 　　4.1线性关系考察分别将2.0，4.0，8.0，10.0，15.0μL，20.0μL的对照品溶液依次注入到液相色谱仪中，然后测量峰面积。峰面积作为纵坐标，浓度作为横坐标，计算出的回归方程为Y=1.293×105 X-183.5，r=0.9993。这就说明水苏糖在2.06-20.6μg范围内具备良好的线性关系。 　　4.2稳定性试验取供试品溶液10μL，吸取过程保证精准，每2小时.进样1次，6次之后测量峰面积，数据显示水苏糖的RSD为0.92%，这也就说明12h内测定有稳定的结果。 　　4.3精密度实验取对照品溶液10μL，吸取过程保证精准，注入液相色谱仪然后测量峰面积，数据显示水苏糖的RSD为（n=5）0.86%，这也就说明仪器十分精密。 　　4.4最低检测限和定量限当信噪比为3：1时经测量水苏糖的最低检测限是0.96μg。当信噪比10：1作为定量限进行测量时，得出水苏糖的定量限是2.86μg。 　　4.5重复性实验将同一样品取出5份，用样品处理法依次测定3种成分的含量。结果水苏糖的RSD为1.1%，实验数据说明该方法有良好的重复性。 　　4.6回收率试验此试验我们用的是加样回收率的方法。现有明确含量的1号样品，我们分别精确地秤取出0.25g共9份，平均分为三组，按高、中、低3个水平依次精确地加入一定