维生素b1片含量测定的方法验证ppt课件.ppt

药物分析实验 实验八 维生素B1片含量测定的方法验证 设计性实验 实验原理 维生素B1又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloride），化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)-甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐 性 质 溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶 硫色素反应： 紫外吸收特性：Amax=246nm 与生物碱沉淀试剂反应 氯化物特性： 特征性鉴别 含量测定 氯化物检查 原理 特征性鉴别——硫色素反应 维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素，色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显现于酸中消失的蓝色荧光。（见刘文英主编《药物分析》第六版，P258） 含量测定 维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm， 实验方法 鉴别反应 取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使其溶解，加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加碱使成碱性，则荧光复现。 含量测定 1.精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg，标示量为每1g药物中含有0.164g维生素B1)，置100ml量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）约70ml，摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 →干燥滤纸过滤→精密量取续滤液5.0ml，置100ml量瓶中，盐酸溶液（9→1000）定容至刻度，摇匀 → 得到供示品溶液。 含量测定 2.精密称取维生素B1对照品25mg，置100ml量瓶中，盐酸溶液（9→1000）定容至刻度，摇匀→ 得到对照品溶液。 3.将2份溶液用紫外分光光度计在246nm处分别测定吸光度，计算即得。 实验内容与要求 鉴别试验 吸收波长选择 精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算RSD% 重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光度）计算标示量%，计算RSD% 稳定性试验：考察样品溶液30min内的稳定性，计算RSD% 加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加样回收率试验 含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。 如何引用？ 线性关系和范围 分析方法的验证 1 精密度试验 2 重现性试验 3 加样回收试验 4 稳定性试验 5 线性与范围 精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置100ml量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）少量，使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 →分别取上述溶液3.00ml、4.00ml、5.00ml、6.00ml、7.00ml置于100ml容量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）至刻度，摇匀→将其置于紫外分光光度计中在246nm处测量→并用C做A的回归曲线。 线性关系 序号 1 2 3 4 5 浓度 （mg/ml） 测定值 稳定性试验 精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置100ml量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）少量，使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 →将其置于紫外分光光度计中在246nm处测量→在0、15、30、45、60min时间点分别测定样品的A246→在0、1、2、4、8、12h分别测定样品的峰面积. RSD 2.0%，则说明样品溶液在多少时间内稳定； RSD 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到RSD 2.0%，否则要尽快测定 精密度试验 目的 检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可信程度 要求 用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶液，同浓度至少平行操作6份，浓度与信号值要在线性范围内 RSD 2.0% ……仪器分析 同批、同法 序号 时间 (min) 信号值 平均 信号值 RSD （%） RSD （%） 1 2 3 4 5 6 7 稳定性试验 重现性试验 目的 考察样品溶液制备方法的可靠程度 要求 同批样品按相同方法制备样品溶液，至少6份,浓度与信号值均要在线性范围内 RSD 2.0% ……仪器分析 重现性试验(示例) 试验 序号 称样量 （g） 测定值 （mg） 含量 （mg/g） 平均含量（ mg/g ） RSD （%） 1 0.1666 22.04 132.29 134.53 0.3% 2.0% 2 0.1667 24.82 148.89 3 0.1669 21.90 131.22 4 0.1742 23.54 135.13 5 0.1667 20.86 125.13 6 … … … 精密度试验（示例 ） 实验 序号 信号值 平均值 RSD 1 0.512 0.510 0.2% (2.0%) 2 0.508 3 0.511 4 0.509 5 0.510 6 0.509 加样回收率