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RIA的基本步骤 1. 加样 2. 孵育 3. 分离结合和游离部分 4. 测放射性 5. 数据处理 基本试剂 (一)特异性结合剂 特异性结合剂包括抗体、血浆结合球蛋白和受体 1. 抗体 抗体的制备是用适宜的纯化的免疫原在动物身上人工免疫，分子量5000的蛋白多肽类物质具有较好的免疫原性。 抗血清质量鉴定的检测指标是滴度、亲和力和特异性。 抗体应具备三个条件：高亲和力、高特异性和高滴度。 2. 标记抗原 高比活度和高放化纯度是保证分析灵敏度的前提； 半衰期不能太短，以保证整个分析过程的完成； 不改变原有抗原的特性。 复合物和游离抗原的分离 抗原抗体在液相环境中反应： 1) 双抗法 2) 聚乙二醇法 3) 葡萄球菌蛋白沉淀法 4) 活性炭吸附法 5) 微孔滤膜法 1) 吸附牢固而且抗体量足够； 2) 不影响抗体的免疫活性； 3) 非特异性结合低； 4) 吸附材料理化性质稳定； 5) 吸附材料价廉易得。 抗体吸附于固体支持物上： 方法包括： 1.试管固相法； 2.微粒固相法； 3.微球固相法。 RIA系统的分析性能及实验设计 分析性能是指一个分析系统总的性能，而不是指个别测定结果的可信度，因此通常都需有较多的测定结果，并用统计学的方法作出判断。 精密度 灵敏度 准确度 精密度是指同一样品重复测定的实测量的离散程度。离散程度越小，则能区别的样品量差别越小，也就是分析系统的精密度越高。 灵敏度就是统计上能与零剂量相区别的最小值。 准确度是指样品的测定值偏离真值的程度，由于实际样品的真值是未知的，常用估计准确度的方法是测量实际样品外加标准品的回收率。理论上回收率一般以90%-110%之间。 RIA的实验设计 1. 尽可能提高灵敏度 先选定尽可能少又能满足控制测量误差要求的标记抗原用量，然后选合适的抗体浓度，要求标准曲线起始段的斜率最高。 2. 提高精密度图的使用范围 应当在上述第一种方案的基础上，适当增加抗体用量，使标准曲线下降不要太快，并在随后的区段有较好的斜率。 放射免疫分析的数据处理 数据处理的基本步骤 选择函数式 对标准管的实测数据进行拟合 求出函数式的各系数 代入待测样品的实测数据 求含量 各种模型 Logit-Log 模型 四参数Logistic模型 四参数质量作用定律模型 放射免疫分析的质量控制 质量控制之目的 质量控制就是对分析工作的误差进行经常性的检查，遇有质量异常则及时采取对策，以保证分析误差控制在可接受的范围内。 放射免疫分析的质量控制 实验室内部质控 实验间质控 实验室内部质控的主要内容 实验误差包括两大类：随机误差和系统误差。 实验误差监控的主要内容： 1、标准曲线的质量； 2、精密度； 3、整批实验的偏差； 4、漂移； 5、批间质控。 二、免疫放射分析(IRMA) IRMA的基本原理 放射性核素标记在抗体上，然后以过量标记抗体与抗原结合，多余的抗体通过一定手段除去，测定复合物的放射性，其活度与待测抗原的量呈正相关。 Ag + Ab* Ab*+AgAb* IRMA和RIA的主要区别： 1. 反应的机制不同：RIA是竞争性反应，IRMA是非竞争性反应，所以，IRMA的灵敏度高于RIA； 2. 反应试剂：RIA的主要反应试剂需三种，IRMA只有二种；而且标记的试剂不同：RIA标记抗原，IRMA标记抗体； 3. 分离方法：IRMA一般都需用单克隆抗体作分离剂，所以其抗原需2个或2个以上抗原决定簇，RIA的抗原则只需一个抗原决定簇； 4. 待测抗原复合物的的反射性：在RIA中与待测抗原呈负相关，而在IRMA中与待测抗原浓度呈正相关； 5. 反应系统中非特异性结合在RIA中主要影响高剂量反应，在IRMA主要影响低剂量反应。 IRMA的基本方法： 1. 双抗夹心法 3. 生物素-亲和素系统 2. 标记第三抗体法 数据处理 1. 平滑样条函数 2. 五参数Logistic模型 2. 三参数质量作用定律模型 第六章 示踪技术及放射性核素显像技术 一、放射性核素示踪技术的原理、类型和特点 概念 是利用放射性核素及其标记化合物作为示踪剂来研究生物机体各种物质的吸收、分布、排泄、转移及转化规律的一门科学。 基本原理 标记物与非标记物具有同一性 放射性物质的可检测性 主要类型 放射性核素示踪技术 体内示踪技术 体外示踪技术 器官与组织显像 功能测定 体液和细胞容积测定 代谢与转化研究 体外放射分析 细胞参入实验 放射自显影 活化分析 特点 灵敏度高，最低水平可达10-12~10-