第15篇 蛋白质的生物合成.pptVIP

第15章 蛋白质的生物合成 〔目的要求〕 理解蛋白质合成的信息来源，三种RNA在蛋白质合成中的作用 2. ?掌握遗传密码的几个重要特性 3.?了解核糖体的结构、掌握氨酰-tRNA合成酶的作用机理 4.?了解蛋白质的合成过程 5.?了解多肽链的折叠与加工过程 蛋白质生物合成是指生物体内遗传信息的翻译过程。 翻译（translation）：mRNA分子中的遗传信息转变为蛋白质的氨基酸排列顺序。 15.1 遗传密码 Genetic code 密码子：是mRNA上连续排列的三个核苷酸序列，并编码一个氨基酸信息的遗传单位。 体外翻译系统的建立 核酸的人工合成 核糖体结合技术 1. 同聚核苷酸 Marshall Nirenberg等建立了大肠杆菌无细胞翻译系统 2.其他密码子的破译 核糖体结合技术是建立在两个基本的事实上：一是人工合成的三聚核苷酸可以作为模板；二是在无GTP时，三聚核苷酸可以促进同源的氨酰-tRNA结合在核糖体上，而不生成蛋白质。 利用由核糖体和三聚核苷酸及其同源的氨酰-tRNA形成的三元复合物能被硝酸纤维素滤膜吸附的性质，可将结合的氨酰-tRNA与其它没有结合的氨酰-tRNA分开。 通过分析结合在硝酸纤维素滤膜上的氨酰-tRNA上氨基酸的性质和原来的三聚核苷酸序列可以弄清某种氨基酸的密码子。 三联体密码子 二、密码子的主要特性 1. 通用性与变异性 原核和真核生物的密码子近乎完全通用。 但线粒体DNA中密码子有例外，如线粒体中AUA编码Met而不是Ile。 古细菌中发现UGA编码天然的吡咯赖氨酸。 2.简并性 一种氨基酸可由几种密码子编码的现象称之为简并性。 大多数a.a有几组不同的密码子，Trp及Met只有一个密码子。简并性可以减少有害的突变。 3. 摇摆性（wobble）： 专一性主要由前二位碱基决定。第三位碱基具有摇摆性（Wobble Hypothesis）。 mRNA密码子的第三个核苷酸（3ˊ端） 与tRNA反密码子第一个核苷酸（5ˊ端）配对时，有时不遵守严格的碱基配对原则，除A-U、G-C外，还可有其它配对方式。 I是最常见的摆动现象。 4. 遗传密码一般不重叠 绝大多数生物的基因是不重叠的，但是少数病毒基因可能重叠，同一段核苷酸序列可以编码一个以上的蛋白质。 噬菌体φX174的基因组中，部分基因的遗传密码重叠。 5.密码子是连续的，没有逗号 读码框如果移码会导致移码突变或缺失突变。 各密码子之间没有分隔信号 15.2 蛋白质生物合成的主要部件 从mRNA 5?端起始密码子AUG到3?端终止密码子之间的核苷酸序列，各个三联体密码连续排列编码一个蛋白质多肽链，称为开放阅读框（open reading frame, ORF）。 真核生物的mRNA没有SD序列,核糖体小亚基识别5’端帽子结构，随后移动到起始密码子处。 起始密码子常处于-CCACCAUGG-序列中,这段保守序列的存在能增加翻译起始的效率,这段序列称为Kozak序列. 二、tRNA在蛋白质合成中的作用 tRNA分子有二个功能: A. 专一性地结合氨基酸，生成氨酰-tRNA，使氨基酸活化。 B. 识别氨基酸密码子，依靠核糖体的特定位点对mRNA的密码子进行识别。 每一个细菌细胞内约有60种不同tRNA（至少有31-32种），真核细胞内可达100-120种。 同一种氨基酸能够连接到多种tRNA上，这一组能运载同一种氨基酸的tRNA称为同工tRNA。 根据tRNA的功能，大致分为三类： 1) 起始tRNA: fMet-tRNAfMet 和 Met-tRNAiMet 2)延伸tRNA 3)校正tRNA tRNASu3+Tyr反密码子为CUA，能识别变异产生的终止密码子UAG。 三、氨酰-tRNA合成酶 氨基酸在掺入肽链前，必须活化生成氨酰-tRNA，获得足够的能量。 活化反应由各种氨酰-tRNA合成酶（AARS）催化。 B. 氨酰-tRNA合成酶特点 图 氨酰-tRNA AARS对特定tRNA的准确识别与结合是确保被活化氨基酸能准备负载的前提。这种专一性是依赖AARS对副密码子的识别而实现的。 副密码子 (Paracodon) ：tRNA中与AARS的“tRNA结合位点”发生特异性分子契合的一种空间密码。 paracodon位于tRNA 的各种环或臂上 不同tRNA 的 paracodon 的定位不同 四、核糖体作为蛋白质合成的工厂 原核细胞约2000个，真细胞106-107个。 核糖体是一个大的核糖核蛋白体，由大亚基和小亚基组成，是蛋白质合成场所。 1. E.coli.核糖体结构 70S: 30S and 50S subu