2产酶工业微生菌种选育.ppt

工业微生物菌种的选育 菌种的选育 要想通过发酵工程获得在种类、产量和质量等方面符合人们要求的产品，最重要的是要有优良的菌种。 一、 工业菌种的育种概述 1.工业菌种的育种方针： 是运用遗传学原理和技术对某个用于特定生物技术目的的菌株进行的多方位的改造。通过改造，可使现存的优良性状强化，或去除不良性状或增加新的性状。 2. 工业菌种育种的方法 自然选育 诱变 杂交育种 基因重组 二、自然选育 概念：不经过人工处理，利用微生物的自然突变进行菌种选育的过程。 原因：多因素低剂量的诱变:低剂量的宇宙射线、短波、诱变物质、微生物自身代谢产生的诱变物质 互变异构效应：A-T(G),G-C(A) 自然突变频率低：仅10-9-10-8左右。所以育种常采用自然选育与诱变选育交替使用。 （4）分离：利用分离技术得到纯种。仍要引入各种选择性压力。 （5）发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。（初筛和复筛） （6）（毒性试验----食品） （1）土样采集方法 采用取样铲，除去表层5cm左右处浮土，取离地面5~25cm处的土约10~25g。将盛入聚乙烯袋或玻璃瓶中，扎好，标记。 在采集植物根际土样时，一般方法是自土壤中慢慢拔出植物根，在大量无菌水中浸渍约20min，洗去粘附在根上的土壤，然后再用无菌水漂洗下根部残留的土，这部分上却为根际土样。 （2）植物体采集方法 在采集叶面时，一般是用灭菌的剪刀、打孔器、安全刀片等，由几片新鲜叶片的同一部位切取一小块，并注意不要损伤周围边缘。 选择叶面时应考虑叶位、叶龄、叶片正反面和在一片叶上的取样部位。 （3） 水样采集方法 用于细菌检测的水样应收集于100ml干净、灭菌的广口塑料瓶中。 由于表层水中含有泥沙，故在采样时应在较深的静水层中采集水样。 方法是：握住采样瓶底浸入水中30-50cm处，然后瓶口朝下打开瓶盖，让水样进入。如果有急流存在的话，应直接将瓶口反向于急流。采集瓶从水中取出时应迅速并带有较大的弧度。水样不应装满采样瓶。所有水样都应在24h之内迅速进行检测，或者4℃下贮存。 （二）增殖培养(富集培养) 为了容易分离到所需的菌种，让无关的微生物至少是在数量上不要增加，可以通过配制选择性培养基，选择一定的培养条件来控制。 例如碳源利用的控制，可选定糖，淀粉、纤维素，或者石油等，以其中的一种为唯一碳源，那么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常生长，而其它微生物就可能死亡或淘汰。这样对下阶段的纯种分离就会顺利得多。 （三）纯种分离 尽管通过增殖培养效果显著，但还是处于微生物的混杂生长状态。因此还必须分离，纯化。 在这—步，增殖培养的选择性控制条件还应进一步应用，而且控制得细一点，好一点。 纯种分离的方法有划线分离法、稀释分离法、组织分离法（适用于高等真菌）。 成功的分离培养方法 （四）筛 选 将分离培养后的各型单菌落接斜面培养，成熟后接入摇瓶，测定其发酵生产能力的过程，分初筛和复筛两步进行。 利用平板的生化反应进行分离筛选 显色圈法 透明圈法 生长圈法 抑菌圈法 1. 显色圈法 对于一些不易产生透明圈产物的产生菌,可在底物平板中加入指示剂或显色剂,使所需微生物能被快速鉴别出来.如筛选果胶酶产生菌时,用含0.2%果胶为惟一碳源的培养基平板,对含微生物样品进行分离,待菌落长成后,加入0.2%刚果红溶液染色4h,具有分解果胶能力的菌落周围便会出现绛红色水解圈.在分离谷氨酸产生菌时,可在培养基中加入溴百里酚蓝,它是一种酸碱指示剂,变色范围在pH6.2～7.6,当pH在6.2以下时为黄色,pH7.6以上为蓝色.若平板上出现产酸菌,其菌落周围会变成黄色,可以从这些产酸菌中筛选谷氨酸产生菌. 2. 透明圈法 透明圈法 　　在固体培养基中渗入溶解性差、可被特定菌利用的营养成分，造成浑浊、不透明的培养基背景。将待筛选在菌落周围就会形成透明圈，透明圈的大小反映了菌落利用此物质的能力。常作为初步筛选菌落的快速方法。 　　在培养基中掺入可溶性淀粉、酪素或CaCO3可以分别用于检测菌株产淀粉酶、产蛋白酶或产酸能力的大小。 3. 生长圈法 通常用于分离筛选氨基酸、核苷酸和维生素等的产生菌。工具菌是一些相对应的营养缺陷型菌株。将待检菌涂布于含高浓度的工具菌并缺少所需营养物质的平板上进行培养，若某菌株能合成平板所需的营养物，在该菌株的菌落周围便会形成一个混浊的生长圈。 4. 抑菌圈法 常用于抗生素产生菌的分离筛选。工具菌采用抗生素的敏感菌。若被检菌能分泌某些抑制工具菌生长的物质，如抗生素等，便会