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生化分离工程 ——总复习 生化分离工程简介 生化分离技术： 从含有目标产物的发酵液、酶反应液或动植物细胞培养液中，提取、精制并加工制成高纯度的、符合规定要求的各种产品的技术，也称为下游加工技术。 生化分离过程的特点： 生化分离的一般流程 ① 发酵液的预处理和固液分离 经过加热、调pH、添加絮凝剂等方法对发酵液进行预处理后，经常采用过滤和离心这两个单元操作进行固液分离。如果产品在细胞内，那么这一步中往往还包括细胞的破碎以释放产品操作，这个过程通常是在进行固液分离之后进行的，这样可以减少分离体系的体积 (相应增加产品浓度)。由于产品释放之后体系中又同时存在有固体和可溶物（产品），因此需要再增加一步固液分离以除去细胞碎片。 发酵液预处理的方法 降低液体黏度 调节pH值 凝聚和絮凝 使用惰性助滤剂 使用反应剂 这个阶段的主要任务是去除（或收集）发酵液中的固相物质，为后续的几个过程提供澄清的原料液体。经过这一步操作，产物的浓度或品质一般不会有太大的改善。 ②初步纯化（提取） 在这一步中，需要除去与目标产物性质差异较大的杂质并对产品进行浓缩。对于不同性质产品，根据其各自的特点采用不同的方法进行分离，沉淀、吸附和萃取是这个步骤中的典型操作。这个步骤往往是由许多个单元操作组合起来的多级加工过程，经过处理，产品的浓度（或纯度）有较大变化。 萃取技术 沉淀技术 盐析沉淀：最常用(NH4)2SO4，次常用Na2SO4 有机溶剂沉淀：丙酮、乙醇，易变性 等电点沉淀 离子交换操作过程 树脂预处理 离子交换过程 洗脱过程：洗脱方法有pH梯度和盐梯度 树脂的再生 五、应用实例 软水制备：利用钠型磺酸树脂除去水中的钙离子和镁离子等碱金属后即可制得软水。 无盐水制备：将原水通过氢型强酸性阳离子交换树脂和羟型强碱或弱碱性阴离子交换树脂的组合，经过离子交换反应，将水中所有的阴、阳离子除去，从而制得纯度很高的无盐纯水。 膜分离技术 ③高度纯化（精制） 这步中所用得技术对产品的针对性（选择性）较强，能够除去与产品的物理性质或化学功能类似的一些杂质。色谱、电泳、结晶是很好的一些纯化方法，产品的品质也能得到很大的提高。 色谱技术（层析技术） 吸附色谱 离子交换色谱 凝胶过滤色谱：分子量大小差异 疏水作用色谱：高浓度盐溶液 亲和色谱：酶和底物的专一性 凝胶过滤色谱 分子筛色谱，体积排阻色谱 原理：利用有一定孔径的多孔的亲水性凝胶作为载体，当分子大小不同的混合物通过这种凝胶柱时，直径大于凝胶孔径的大分子由于不能进入胶粒内部，便随着溶剂在胶粒间隙向下移动并最先流出柱外；直径小于凝胶孔径的分子能不同程度的自由出入凝胶珠的内外。这样不同大小的分子由于所经的路径不同从而得到分离，大分子物质先被洗脱下来，小分子物质后被洗脱下来。 凝胶层析的应用 脱盐 分离提纯 测定高分子物质的分子量 高分子溶液的浓缩 蛋白质复性研究 柱层析操作过程 （1）装柱：①干法装柱 ②湿法装柱 注意：湿法装柱中柱内预留一部分水，防止气泡的产生，装柱过程要连贯。平衡。 （2）加样：①干法加样 ②湿法加样 注意：加样过程中，要防止产生飞溅，量要适中。 （3）洗脱：以设定好的流速加入洗脱剂，可以是单一溶剂，也可以梯度洗脱。 注意：不使柱表面的溶液流干，柱上端保留一层溶液。 （4）收集：每隔10mL收集一试管，使用层析的手段或紫外检测器进行实时的检测，合并具有相同物质的流份。 电泳技术 SDS电泳：测定蛋白质分子量 等电聚焦电泳：测蛋白质等电点 ④成品加工 根据产品应用时的要求，在产物经过提取和精制后，一般还需要一些加工步骤。例如浓缩、无菌过滤和去热原、干燥、加入稳定剂等。 干燥技术 针对热敏性物质开发的单元操作有： 瞬时快速干燥：接触时间短、气流温度高 喷雾干燥：时间短、热效低、可同时造粒 气流干燥：接触时间较长 沸腾干燥：接触时间最长，热效最高 冷冻干燥：适用于粘稠状物料，活性保持最好 微波干燥：时间短，效率高 红外干燥：温度高，干燥速度快 抗生素的生产过程是一个典型的生化分离过程，包括以上四个步骤，如表3所示。产品的浓度在分离（初步纯化）过程中增加幅度最大，但产品的纯度却是在纯化过程中提高最多。 * * 《生化分离工程》 1、产品丰富：产品的多样性导致分离方法的多样性 2、绝大多数生物分离方法来源于化学分离 3、生物分离一般比化工分离难度大 （1）成分复杂 （2）悬液中的目标产物浓度低 （3）生物活性，条件相对温和 （4）生物产品要求高质量 （5）获得高纯度的干燥产品 （6